Cell Direct RT qPCR Kiti—Taqman Direct Cell Lisis Cell Ready Tek Adımlı qRT-PCR Kitleri Probu
Açıklamalar
Bu ürün, RT-qPCR reaksiyonları için kültürlenmiş hücre örneklerinden hızlı bir şekilde RNA salmak için benzersiz bir lizis tampon sistemi kullanır, bu da zaman alan ve zahmetli RNA saflaştırma sürecini ortadan kaldırır ve gerekli RNA şablonunu elde etmek için sadece 7 dakikada, kit tarafından sağlanan 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ile gerçek zamanlı kantitatif PCR sonuçlarını hızlı ve verimli bir şekilde elde edebilir.
5× Direct RT Mix ve 2× Direct qPCR Mix-Taqman, güçlü inhibitör toleransına sahiptir ve şablon olarak ölçülecek numunenin lizatını kullanarak etkili ters çevirme ve spesifik amplifikasyon gerçekleştirebilir.Reaktif, Foregene Ters Transkriptaz, Sıcak D-Taq DNA Polimeraz, dNTP'ler, MgCl içerir2, Örnekleri hızlı ve kolay bir şekilde tespit etmek için lizis tamponu ile kullanılabilen ve yüksek hassasiyet, özgüllük ve stabilite özelliklerine sahip Reaksiyon Tamponu, PCR Optimize Edici ve Stabilizatör.
Özellikler
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit bileşenleri
| Hızlı KolayTMHücre Direkt RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit bileşenleri 20μl qPCR Reaksiyon Sistemi | DRT-01021 | DRT-01022 | Not | |
| 200 ton | 1000 ton | |||
|
Parça I | Tampon CL | 4 mi | 20 mi | Hücre Lizizi |
| Foregene Proteaz Plus II | 80 ul | 400 ul | ||
| Tampon ST | 400 ul | 1 ml × 2 | ||
|
Parça II | DNA Silgisi | 80 ul | 400 ul | |
| 5×Doğrudan RT Karışımı * | 160 ul | 800 ul | RT | |
| 2× Doğrudan qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX Referans Boyası | 40 ul | 200 ul | ||
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1.7 ml | 10 mi | ||
| Kullanım klavuzu | 1 parça | 1 parça | ||
*:Hücre Parçalama, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ayrıca satın alınabilir
Özellikler ve avantajlar
■Basit ve etkili: Cell Direct RT teknolojisi ile RNA örnekleri sadece 7 dakikada alınabilir.
■ Numune talebi küçüktür, 10 hücre kadar düşük test edilebilir.
■ Yüksek verim: 384, 96, 24, 12, 6 kuyulu plakalarda kültürlenen hücrelerde RNA'yı hızla saptayabilir.
■ DNA Eraser, salınan genomları hızlı bir şekilde kaldırabilir ve sonraki deneysel sonuçlar üzerindeki etkiyi büyük ölçüde azaltabilir.
■ Optimize edilmiş RT ve qPCR sistemi, iki adımlı RT-PCR ters transkripsiyonunu daha verimli ve PCR'yi daha spesifik ve RT-qPCR reaksiyon inhibitörlerine karşı daha dirençli hale getirir.
Kit uygulaması
Uygulama kapsamı: kültürlenmiş hücreler.
- Örnek parçalanmasıyla salınan RNA: yalnızca bu kitin RT-qPCR şablonu için geçerlidir.
- Kit aşağıdaki amaçlar için kullanılabilir: gen ekspresyonu analizi, siRNA aracılı gen susturma etkisinin doğrulanması, ilaç taraması vb.
Depolama ve Raf ömrü
Bu kitin I. Kısmı 4'te saklanmalıdır.℃;Kısım II -20°C'de saklanmalıdır.
Foregene Protease Plus II 4'te saklanmalıdır.℃, -20 ℃'de dondurmayın.
reaktif 2×Doğrudan qPCR Mix-Taqman -20'de saklanmalıdır℃karanlıkta;sık kullanılırsa 4'te de saklanabilir℃ kısa süreli depolama için (10 gün içinde tüketin).
Real Time PCR primer tasarım ilkeleri
İleri Astar ve Ters Astar
Real Time PCR için primer tasarımı çok önemlidir.Primerler, PCR amplifikasyonunun özgüllüğü ve etkinliği ile ilgilidir ve aşağıdaki ilkelere göre tasarlanabilir:
- Astar uzunluğu: 18-30bp.
- GC içeriği: %40-60.
- Tm değeri: Primer 5 gibi primer tasarım yazılımları primerin Tm değerini verebilir.Yukarı ve aşağı primerlerin Tm değerleri mümkün olduğu kadar yakın olmalıdır.Tm hesaplama formülü de kullanılabilir: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR yapılırken, genellikle 5 °C'lik primer Tm değerinin altındaki bir sıcaklık, tavlama sıcaklığı olarak seçilir (tavlama sıcaklığındaki karşılık gelen artış, PCR reaksiyonunun özgüllüğünü artırabilir).
- Primerler ve PCR ürünleri:
- Tasarım primeri PCR amplifikasyon ürünü uzunluğu tercihen 100-150bp'dir.
- Şablonun ikincil yapısal alanındaki tasarım astarlarından mümkün olduğunca kaçınılmalıdır.
- Yukarı ve aşağı primerlerin 3' uçları arasında 2 veya daha fazla tamamlayıcı baz oluşumundan kaçının.
- Primer 3' terminal tabanı, ardışık 3 ek G veya C ile mevcut olamaz.
- Primerlerin kendileri tamamlayıcı yapılara sahip olamazlar, aksi takdirde PCR amplifikasyonunu etkileyen saç tokası bir yapı oluşacaktır.
- ATCG, primer sekansında mümkün olduğu kadar eşit dağıtılmalı ve T olarak 3' terminal tabanından kaçınılmalıdır.
Ek1:Cell DoğrudanRT-qPCR Kit bileşenlerit ek paket
1. Hücre Parçalama Çözümü
| Hücre Parçalama Çözümü | |||
| Kit bileşenleri (24 kuyulu lizis sistemi / kuyu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ton | 500 ton | ||
| ParçaBEN | Tampon CL | 20 mi | 100 mi |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 ul | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 mi | |
| ParçaIII | DNA Silgisi | 400 ul | 1 ml × 2 |
| RT Karışımı | |
| Kit bileşenleri (20 ul reaksiyon sistemi) | DRT-01011-B1 |
| 200 ton | |
| 5× Doğrudan RT Karışımı | 800 ul |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Karışımı | ||
| Kit bileşenleri (20 ul reaksiyon sistemi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ton | 1000 ton | |
| 2× Doğrudan qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Referans Boyası | 40 ul | 200 ul |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1.7 ml | 10 mi |
Kullanım kılavuzları:
