Hücre Toplam RNA İzolasyon Kiti Hücreden Toplam RNA İzolasyon Saflaştırma Kitleri
Takım Açıklaması:
Yüksek düzeyde saflaştırılmış ve yüksek kaliteli toplam RNA, 11 dakikada çeşitli kültürlenmiş hücrelerden elde edilebilir.
RNaz İçermez
Oda sıcaklığında çalıştırılır (15-25 ℃)
DNA Temizleme Kolonlu
Yüksek RNA verimi
Hızlı: Çıkarmayı 11 dakikada bitirin
Güvenlik:Hiçbiri Organik kimyasal
Tanım
Bu kit, 96, 24, 12 ve 6 oyuklu plakalarda kültürlenmiş hücrelerden yüksek saflıkta ve yüksek kaliteli toplam RNA'yı verimli bir şekilde çıkarabilen Foregene tarafından geliştirilen spin kolonu ve formülü kullanır.
Kit, süpernatanı ve hücre lizatını kolayca ayırabilen, genomik DNA'yı bağlayabilen ve çıkarabilen verimli bir DNA Temizleme Sütunu sağlar.Operasyon basit ve zaman kazandıran.
TYalnızca RNA Sütunu, RNA'yı benzersiz bir formülle verimli bir şekilde bağlayabilir.Aynı anda çok sayıda numune işlenebilir.
Kit bileşenleri
| Kit bileşimi | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 ton | 200 ton | |
| Tampon crl1* | 25 mL | 100ml |
| Tampon crl2 | 15ml | 60 mL |
| Tampon RW1* | 25 mL | 100ml |
| Tampon RW2 | 24ml | 96ml |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 10 mL | 40ml |
| Yalnızca RNA Sütunu | 50 | 200 |
| DNA Temizleme Kolonu | 50 | 200 |
| Talimat | 1 | 1 |
*Buffer cRL1 ve Buffer RW1 tahriş edici kaotropik tuzlar içerdiğinden çalışma sırasında lütfen eldiven giyin ve koruyucu önlemler alın.
Özellikler ve avantajlar
■ Tüm süreç oda sıcaklığında (15-25°C), buz banyosu ve düşük sıcaklıkta santrifüjleme olmadan gerçekleştirilir.
■ Kitin tamamı RNaz İçermez, RNA bozulması konusunda endişelenmenize gerek yok.
■ DNA Temizleme Sütunu spesifik olarak DNA'yı bağlar, böylece kit ilave DNaz eklemeden genomik DNA kontaminasyonunu giderebilir.
■ Yüksek RNA verimi: Yalnızca RNA Sütunu ve benzersiz formül, RNA'yı verimli bir şekilde saflaştırabilir.
■ Yüksek hız: çalıştırması kolay ve 11 dakikada tamamlanabilir.
■ Güvenlik: Organik reaktif gerekmez.
■ Yüksek kalite: Saflaştırılmış RNA yüksek saflıkta olup, protein ve diğer safsızlıklar içermez ve sonraki çeşitli deneyleri karşılayabilir.
Kit uygulaması
96, 24, 12 ve 6 oyuklu plakalarda kültürlenmiş hücrelerden toplam RNA'nın ekstraksiyonu ve saflaştırılması için uygundur.
iş akışı
Diyagram
Hücre Toplam RNA İzolasyon Kitinin agaroz jel pil diyagramı, yukarıdaki farklı sayıda hücreyi tedavi etti, 20μl hacim elüsyonu, 2μl saflaştırılmış toplam RNA %1 aldı.
Depolama ve raf ömrü
Kit, oda sıcaklığında (15–25 ℃) 12 ay veya daha uzun süre (24 ay) için 2–8 ℃ saklanabilir.
Tampon cRL1, 2-hidroksi-1-etanetiol (isteğe bağlı) eklendikten sonra 4 °C'de 1 ay saklanabilir.
RNA ekstrakte edilmiyor veya RNA verimleri düşük
Genellikle doku numunesi RNA içeriği, çalışma yöntemi, elüsyon hacmi, vb. gibi geri kazanım verimliliğini etkileyen çeşitli faktörler vardır.
1. Çalışma sırasında buz banyosu veya kriyojenik (4 °C) santrifüjleme yapılmıştır.
Öneri: Tüm süreç boyunca oda sıcaklığında (15-25°C) çalıştırın, düşük sıcaklıklarda buz banyosu ve santrifüj yapmayın.
2. Uygun olmayan numune muhafazası veya aşırı numune saklama süresi.
Öneri: Numuneleri -80 °C'de saklayın veya sıvı nitrojen içinde dondurun ve tekrarlanan donma-çözülme kullanımından kaçının;RNA ekstraksiyonu için taze doku veya kültürlenmiş hücreler kullanmayı deneyin.
3. Yetersiz numune parçalanması.
Öneri: Dokuyu homojenleştirirken, dokunun yeterince homojen olduğundan ve doku hücrelerinin RNA salınımını açıklamak için yeterince bölündüğünden emin olun.
4. Eluent doğru eklenmemiş.
Öneri: RNaz İçermeyen ddH'nin olduğunu doğrulayın2O, saflaştırma kolonu zarının ortasına damla damla eklenir.
5. Tam etanolün doğru hacmi Tampon RL2 veya Tampon RW2'ye eklenmedi.
Öneri: Talimatları izleyin, Buffer RL2 ve Buffer RW2'ye doğru hacimde mutlak etanol ekleyin ve kiti kullanmadan önce iyice karıştırın.
6. Doku örneği dozu uygun değil.
Öneri: 10-20 mg doku veya (1-5) × 10 kullanın6500 µl tampon RL1 başına hücreler, çünkü aşırı doku kullanımı RNA ekstraksiyonunun azalmasına neden olabilir.
7. Uygun olmayan elüsyon hacmi veya eksik elüsyon.
Öneri: Saflaştırma kolonunun elüsyon hacmi 50-200 µl'dir;elüsyon etkisi tatmin edici değilse, önceden ısıtılmış RNase-Free ddH eklendikten sonra oda sıcaklığı yerleştirme süresinin uzatılması önerilir.2O, örneğin 5-10 dakika.
8. Saflaştırma kolonunda, Tampon RW2 yıkamasından sonra etanol tortusu bulunur.
Öneri: Tampon RW2 yıkamasından sonra etanol kalıntısı varsa, 1 dakika boş tüp santrifüjleme, boş tüp santrifüj işlemi için süre 2 dakikaya çıkarılabilir veya kalıntı etanolü yeterince uzaklaştırmak için saflaştırma kolonu 5 dakika oda sıcaklığında tutulabilir.
Saflaştırılmış RNA bozulur
Saflaştırılmış RNA'nın kalitesi örneğin korunması, RNaz kontaminasyonu ve manipülasyonu gibi faktörlerle ilişkilidir.
1. Doku örnekleri zamanında tutulmuyor.
Öneri: Doku örnekleri veya hücreler toplandıktan sonra zamanında kullanılmazsa, hemen -80 °C'de veya sıvı nitrojende dondurun.RNA'yı çıkarmak için, mümkün olduğunda yeni alınmış bir doku veya hücre örneği kullanın.
2. Doku örneklerinin tekrar tekrar dondurulup çözülmesi.
Öneri: Doku örneklerini saklarken, korumak için bunları küçük parçalara ayırmak ve bunları kullanırken örneğin tekrar tekrar dondurulup çözülmesini ve RNA'nın bozulmasını önlemek için parçalardan birini çıkarmak en iyisidir.
3. Ameliyat sırasında RNase takılır veya tek kullanımlık eldiven, maske vb. giyilmez.
Öneri: RNA ekstraksiyon deneyleri en iyi şekilde ayrı RNA manipülasyon odalarında yapılır ve deneyden önce tablo temizlenir.
RNase girişinin neden olduğu RNA bozulmasını en aza indirmek için deney sırasında tek kullanımlık eldivenler ve maskeler giyin.
4. Reaktifler kullanım sırasında RNase ile kontamine olur.
Öneri: İlgili deneyler için yeni bir Hayvan Total RNA İzolasyon Kiti ile değiştirin.
5. RNA manipülasyonunda kullanılan santrifüj tüpleri, uçları vb. RNaz ile kontamine olmuştur.
Öneri: RNA ekstraksiyonunda kullanılan santrifüj tüplerinin, uçlarının, pipetlerin vb. hiçbirinin RNaz İçermediğini doğrulayın.
Elde edilen saflaştırılmış RNA aşağı akış deneylerini etkiler
Saflaştırma sütunu tarafından saflaştırılan RNA, eğer tuz iyonları, protein içeriği çok büyükse, ters transkripsiyon,Northern Blot ve ark.
1. Elüsyona tabi tutulan RNA'da tuz iyonu kalıntıları vardır.
Öneri: Tampon RW2'ye doğru hacimde etanol eklendiğini onaylayın ve işlem için belirtilen santrifüj hızında 2 saflaştırma kolonu yıkaması gerçekleştirin;herhangi bir tuz iyonu kalıntısı varsa, saflaştırma kolonunu oda sıcaklığında 5 dakika boyunca Tampon RW2'ye bırakın ve tuz kontaminasyonunun çıkarılmasını en üst düzeye çıkarmak için santrifüjleme yapın.
2. Yıkanmış RNA'da etanol kalıntısı.
Öneri: Tampon RW2 yıkamasından sonra, boş tüp santrifüjleme işlemini çalışma için belirtilen santrifüjleme hızında gerçekleştirin, boş tüp santrifüjleme işleminin süresini hala etanol kalıntısı varsa 2 dakikaya çıkarın veya oda sıcaklığında 5 dakika bırakın
