• Facebook
  • Linkedin
  • Youtube

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

için SSSHayvan Toplam RNA İzolasyon kiti

Karşılaşabileceğiniz sorunların aşağıdaki analizihayvan dokusu/hücre RNA ekstraksiyonu will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA ekstrakte edilmiyor veya RNA verimleri düşük

Genellikle doku numunesi RNA içeriği, çalışma yöntemi, elüsyon hacmi, vb. gibi geri kazanım verimliliğini etkileyen çeşitli faktörler vardır.

1. Çalışma sırasında buz banyosu veya kriyojenik (4 °C) santrifüjleme yapılmıştır.

Öneri: Tüm süreç boyunca oda sıcaklığında (15-25°C) çalıştırın, düşük sıcaklıklarda buz banyosu ve santrifüj yapmayın.

2. Uygun olmayan numune muhafazası veya aşırı numune saklama süresi.

Öneri: Numuneleri -80 °C'de saklayın veya sıvı nitrojen içinde dondurun ve tekrarlanan donma-çözülme kullanımından kaçının;RNA ekstraksiyonu için taze doku veya kültürlenmiş hücreler kullanmayı deneyin.

3. Yetersiz numune parçalanması.

Öneri: Dokuyu homojenleştirirken, dokunun yeterince homojen olduğundan ve doku hücrelerinin RNA salınımını açıklamak için yeterince bölündüğünden emin olun.

4. Eluent doğru eklenmemiş.

Öneri: RNaz İçermeyen ddH'nin olduğunu doğrulayın2O, saflaştırma kolonu zarının ortasına damla damla eklenir.

5. Tam etanolün doğru hacmi Tampon RL2 veya Tampon RW2'ye eklenmedi.

Öneri: Talimatları izleyin, Buffer RL2 ve Buffer RW2'ye doğru hacimde mutlak etanol ekleyin ve kiti kullanmadan önce iyice karıştırın.

6. Doku örneği dozu uygun değil.

Öneri: 10-20 mg doku veya (1-5) × 10 kullanın6500 µl tampon RL1 başına hücreler, çünkü aşırı doku kullanımı RNA ekstraksiyonunun azalmasına neden olabilir.

7. Uygun olmayan elüsyon hacmi veya eksik elüsyon.

Öneri: Saflaştırma kolonunun elüsyon hacmi 50-200 µl'dir;elüsyon etkisi tatmin edici değilse, önceden ısıtılmış RNase-Free ddH eklendikten sonra oda sıcaklığı yerleştirme süresinin uzatılması önerilir.2O, örneğin 5-10 dakika.

8. Saflaştırma kolonunda, Tampon RW2 yıkamasından sonra etanol tortusu bulunur.

Öneri: Tampon RW2 yıkamasından sonra etanol kalıntısı varsa, 1 dakika boş tüp santrifüjleme, boş tüp santrifüj işlemi için süre 2 dakikaya çıkarılabilir veya kalıntı etanolü yeterince uzaklaştırmak için saflaştırma kolonu 5 dakika oda sıcaklığında tutulabilir.

Saflaştırılmış RNA bozulur

Saflaştırılmış RNA'nın kalitesi örneğin korunması, RNaz kontaminasyonu ve manipülasyonu gibi faktörlerle ilişkilidir.

1. Doku örnekleri zamanında tutulmuyor.

Öneri: Doku örnekleri veya hücreler toplandıktan sonra zamanında kullanılmazsa, hemen -80 °C'de veya sıvı nitrojende dondurun.RNA'yı çıkarmak için, mümkün olduğunda yeni alınmış bir doku veya hücre örneği kullanın.

2. Doku örneklerinin tekrar tekrar dondurulup çözülmesi.

Öneri: Doku örneklerini saklarken, korumak için bunları küçük parçalara ayırmak ve bunları kullanırken örneğin tekrar tekrar dondurulup çözülmesini ve RNA'nın bozulmasını önlemek için parçalardan birini çıkarmak en iyisidir.

3. Ameliyat sırasında RNase takılır veya tek kullanımlık eldiven, maske vb. giyilmez.

Öneri: RNA ekstraksiyon deneyleri en iyi şekilde ayrı RNA manipülasyon odalarında yapılır ve deneyden önce tablo temizlenir.

RNase girişinin neden olduğu RNA bozulmasını en aza indirmek için deney sırasında tek kullanımlık eldivenler ve maskeler giyin.

4. Reaktifler kullanım sırasında RNase ile kontamine olur.

Öneri: İlgili deneyler için yeni bir Hayvan Total RNA İzolasyon Kiti ile değiştirin.

5. RNA manipülasyonunda kullanılan santrifüj tüpleri, uçları vb. RNaz ile kontamine olmuştur.

Öneri: RNA ekstraksiyonunda kullanılan santrifüj tüplerinin, uçlarının, pipetlerin vb. hiçbirinin RNaz İçermediğini doğrulayın.

Elde edilen saflaştırılmış RNA aşağı akış deneylerini etkiler

Saflaştırma sütunu tarafından saflaştırılan RNA, eğer tuz iyonları, protein içeriği çok büyükse, ters transkripsiyon,Northern Blot ve ark.

1. Elüsyona tabi tutulan RNA'da tuz iyonu kalıntıları vardır.

Öneri: Tampon RW2'ye doğru hacimde etanol eklendiğini onaylayın ve işlem için belirtilen santrifüj hızında 2 saflaştırma kolonu yıkaması gerçekleştirin;herhangi bir tuz iyonu kalıntısı varsa, saflaştırma kolonunu oda sıcaklığında 5 dakika boyunca Tampon RW2'ye bırakın ve tuz kontaminasyonunun çıkarılmasını en üst düzeye çıkarmak için santrifüjleme yapın.

2. Yıkanmış RNA'da etanol kalıntısı.

Öneri: Tampon RW2 yıkamasından sonra, boş tüp santrifüjleme işlemini çalışma için belirtilen santrifüjleme hızında gerçekleştirin, hala etanol kalıntısı varsa boş tüp santrifüjleme işleminin süresini 2 dakikaya çıkarın veya etanol kalıntısının çıkarılmasını en üst düzeye çıkarmak için boş tüp santrifüjlemeden sonra 5 dakika oda sıcaklığında bırakın.

Nükleik asit numune türlerinin izolasyonu

Foregene'nin RNA İzolasyon kitleri, aşağıdaki numune kaynaklarından toplam RNA izolasyonu/ekstraksiyonu elde edebilir: Hayvan dokusu, bitki, hücreler, viral, kan, vs.

Kiti nasıl saklarım?

24 ay boyunca oda sıcaklığında saklama.


Gönderim zamanı: Mart-01-2022