• Facebook
  • Linkedin
  • Youtube

Bukkal sürüntü/FTA kartı DNA ekstraksiyon kiti

olası sorunların aşağıdaki analizibukkalçubukla/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Arıtma sütunu tıkalı

 

 

Bu kitte, genomik DNA ekstraksiyon işleminde, saflaştırma kolonu, santrifüjleme aşaması olmadan doğrudan numune enzimatik lizis karışımı üzerine adsorbe edilir ve numunenin eksik enzimizasyonu ve yüksek viskozitesi nedeniyle saflaştırma kolonu bloke edilebilir.

Aşağıdaki olası nedenler şunlardır:

1. Doku örneklerinin eksik enzimatik sindirimi.

Öneri: Foregene Protease'in numune işleme süresi uygun şekilde uzatılabilir veya süpernatan 12.000 rpm'de (~13.400 rpm) santrifüjlemeden sonra alınabilir.× g) 5 dk.

2. Doku örneklerinin veya büyük dokuların aşırı kullanımı.

Öneri: 1'i geçmemek en iyisidirbukkal örnekte sürüntü;numune çok büyükse, buna göre Tampon ST1, Foregene Proteaz ve tampon ST2'nin dozunu artırın.

3. Numune viskozitesi çok yüksek.

Öneri: Numuneler, genomik DNA ekstraksiyonundan önce 10 mM Tris-HCl ile uygun şekilde seyreltilebilir.

4. Kan kartının parçaları emildi.

Öneri: Blood spot (FTA Card) genomik ekstraksiyonunun 6. adımının geçici santrifüj süresi uygun şekilde uzatılabilir.

 

Düşük verim veya DNA yok

 

Numune kaynağı, numune saklama koşulları, numune hazırlama, manipülasyon vb. dahil olmak üzere genellikle genomik DNA verimini etkileyen çeşitli faktörler vardır.

Ekstraksiyon sırasında genomik DNA elde edilemez

Olası nedenler aşağıdaki gibidir:

1. Numunelerin uygun olmayan şekilde saklanması veya çok uzun süre saklanması, genomik DNA bozulmasına yol açar.

Öneri: Oral sürüntülerden tercihen taze örnek alınmalıdır ve genomik DNA ekstraksiyon operasyonları için korunmuş sürüntülerin kullanılması önerilmez;kan lekesi numuneleri kaliteli olmalı ve saklama süresi çok uzun olmamalıdır.

2. Çok az doku kullanımı, karşılık gelen genomik DNA'nın çıkarılmamasına neden olabilir.

Öneri:bukal operasyon kılavuzundaki sürüntü örnekleme talimatları ve genomik DNA ekstraksiyonu için oral sürüntüye yeterli sayıda hücrenin eklenebilmesi için mümkün olduğu kadar çok kez silin;kan lekesi örneği ekstraksiyonu için kan lekesi kesme alanı uygun şekilde artırılabilir.

3. Foregene Protease uygun şekilde korunmamıştır, bu da aktivitesinde bir azalmaya veya inaktivasyona neden olur.

Öneri: Saklama koşullarını onaylayınForegene Protease veya enzimatik reaksiyon için yeni bir Foregene Protease ile değiştirin.

4. Kitin uygun olmayan şekilde saklanması veya saklama süresinin çok uzun olması, kit içindeki bazı bileşenlerin arızalanmasına neden olur.

Öneri: Yeni bir tane satın alınbukkal DNA sürüntüizolasyon İlgili prosedürler için kit.

5. Tampon WB, mutlak etanol eklemez.

Öneri: Tampon WB'nin doğru hacimde mutlak etanol eklediğini onaylayın.

6. Eluent, silikon filme doğru şekilde eklenmemiş.

Öneri: 65 ekleyin°Cönceden ısıtılmış elüent silikon membranın ortasına düşer ve elüsyon etkinliğini artırmak için 5 dakika oda sıcaklığında bırakılır.

Ldüşük verimli genomik DNA yalıtılmış

Aşağıdaki olası nedenler şunlardır:

1. Numunelerin uygun olmayan şekilde saklanması veya çok uzun süre saklanması, genomik DNA bozulmasına yol açar.

Öneri: Oral sürüntülerden tercihen taze örnek alınır ve korunmuş sürüntüler genomik DNA ekstraksiyonu için kullanılmamalıdır.

2. Doku örneği miktarı çok küçükse, çıkarılan genomik DNA içeriği daha az olacaktır.

Öneri: Çalıştırma kılavuzundaki oral sürüntü örnekleme talimatlarını izleyin ve genomik DNA ekstraksiyonu için oral eküvyona yeterli sayıda hücre eklenebilmesi için mümkün olduğu kadar çok kez silin.

3. Foregene Protease uygun şekilde korunmamıştır, bu da aktivitesinde bir azalmaya veya inaktivasyona neden olur.

Öneri: Saklama koşullarını onaylayınthe Foregene Protease veya yenisiyle değiştirin Enzimatik reaksiyon için Foregene Proteaz.

4. Eluent problemleri.

Öneri: Elüsyon için Tampon EB kullanın;ddH kullanılıyorsa2O veya diğer eluentler, elüatın pH'ının 7,0-8,5 arasında olduğunu onaylayın.

5. Elüat doğru şekilde damla damla eklenmemiştir.

Öneri: Elüsyon etkinliğini artırmak için silikon membranın ortasına eluent damlaları ekleyin ve oda sıcaklığında 5 dakika bekletin.

6. Elüsyon sıvısı çok az birikiyor.

Öneri: En azından talimatlarda gerektiği gibi genomik DNA elüsyonu için eluent kullanın.hayırsız 15'ten fazlaμl.

Lne saflık of genomik DNAyalıtılmış

Düşük genomik DNA saflığı, aşağı akış deneylerinin başarısızlığına veya tatmin edici olmayan sonuçlarına yol açabilir, örneğin: enzimler kesilip açılamıyor, PCR ilgilenilen gen parçasını alamıyor, vb.

Olası nedenler aşağıdaki gibidir:

1. Heteroprotein kirliliği, RNA kirliliği.

Analiz: Saflaştırma kolonu, Tampon PW kullanılarak yıkanmadı;Tampon PW yıkama saflaştırma kolonu, doğru santrifüj hızı kullanılarak yıkanmadı.

Öneri: Etanol eklemeden önce süpernatanda çökelme olmadığından emin olun;arıtma kolonunu talimatlara göre yıkadığınızdan emin olun ve bu adım atlanamaz.

2. Safsızlık iyon kirliliği.

Analiz: Tampon WB yıkama saflaştırma kolonu çıkarıldı veya yalnızca bir kez yıkandı, bu da artık iyonik kontaminasyona neden oldu.

Öneri: Kalıntı iyonları olabildiğince uzaklaştırmak için Tampon WB'yi belirtilen şekilde 2 kez yıkadığınızdan emin olun.

3. RNA enzim kontaminasyonu.

Analiz: Yabancı RNazlar tampona eklendi;Tampon PW yıkama işlemi yanlıştı ve in vitro transkripsiyon gibi aşağı akış RNA deneysel işlemlerini etkileyen RNaz kalıntılarına neden oldu.

Öneri: Foregene serisi nükleik asitısolation kitleri, ilave RNaz ilavesi olmadan RNA'yı kaldırabilir,Böylece bukkal Swab/FTA Kartı DNA İzolasyon Kitiihtiyaç't RNaz ekleyin;Tampon PW yıkama saflaştırma sütunu için talimatları izlediğinizden emin olun ve bu adım atlanamaz.

4. Etanol kalıntısı.

Analiz: Tampon WB, saflaştırma kolonunu yıkadıktan sonra boş tüp santrifüjü gerçekleştirmedi.

Öneri: Talimatlara göre doğru boş tüp santrifüj işlemini gerçekleştirin.

5. Diğer safsızlık kirliliği.

Analiz: Kayıtlı numuneler veya özel numuneler ön işleme tabi tutulmaz.

Öneri: Numuneyi talimatlara göre iyice ön işleme tabi tutun.

 


Gönderim zamanı: 18 Mart-2022