• Facebook
  • Linkedin
  • Youtube

1:Deneysel malzemeleri zamanında değiştirin

haber812 (1) 

Negatif kontrol (NTC) kurun ve bunu birçok kez tekrarlayın.Laboratuvarda PCR ürünü kontaminasyonu olduğu tespit edildiğinde, tüm deney malzemelerini zamanında değiştirin.Primerleri yeniden seyreltin ve hazırlayın, pipet ucunu, EP tüpünü, ddH2O vb. yeniden sterilize edin, yeni bir pipetle değiştirin ve PCR deneyleri yapmak için diğer laboratuvarları geçici olarak ödünç alın.Deneye devam etmeden önce kontamine laboratuvar havalandırılmalı ve PCR ürünü kontaminasyonu ortadan kalkana kadar ultraviyole ışınlarla ışınlanmalıdır.

2: UV'ye maruz kalma süresini uzatın

haber812 (2)

DNA kontaminasyonunu gidermek için normal ultraviyole radyasyonun normalden 2 saat daha uzatılması gerektiğini belirtmekte fayda var.Buna rağmen, UV ışınlamasının DNA kontaminasyonunun küçük parçalarını (200bp'nin altında) uzaklaştırma üzerindeki etkisi hala iyi değildir.

Ultraviyole dalga boyu (nm) genellikle 254/300nm'dir ve 30 dakika ışınlamak yeterlidir.Kalıntı PCR ürünlerinin kontaminasyonunu ortadan kaldırmak için UV seçilirken, PCR ürününün uzunluğu ve ürün dizisindeki bazların dağılımı dikkate alınmalıdır.UV ışıması yalnızca 500 bp'nin üzerindeki uzun fragmanlar için etkilidir ve kısa fragmanlar üzerinde çok az etkisi vardır.

UV ışıması sırasında, PCR ürünündeki pirimidin bazları dimerler oluşturacaktır.Bu dimerler uzantıyı sonlandırabilir, ancak DNA zincirindeki tüm pirimidinler dimer oluşturamaz ve UV ışıması da dimerleri kırabilir..Dimer oluşumunun derecesi, UV dalga boyuna, pirimidin dimer tipine ve dimer bölgesine bitişik nükleotit dizisine bağlıdır.Bu nedenle, PCR amplifiye fragmanları küçükse, UNG anti-PCR ürün kontaminasyon sisteminin kullanılması önerilir.

3:Yaygın olarak kullanılan DNA kirlilik temizleyicileri

haber812 (3)

Kaçınılması zor olan pipetler eklendiğinde aerosoller kolayca üretilir ve hızla yerleşir.Bu nedenle, DNA kirliliğinin yayılmasını önlemek için özel DNA kirliliği temizleyicilerin sıklıkla kullanılması şüphesiz iyi bir seçimdir.

4:UNG kirlilik önleme sistemini kullanın

haber812 (4)

PCR ürünü kontaminasyonu giderildikten sonra test laboratuvarı, PCR ürünü kontaminasyonunu önlemek için UNG anti-PCR ürünü kontaminasyon sistemini kullanabilir.Genel laboratuvarlarda basit deney bölmeleri yapabilir, PCR ürün alanını diğer alanlardan kesin olarak ayırabilir, belirli laboratuvar kural ve yönetmeliklerini oluşturabilir, PCR ürün kontaminasyonunun oluşmasını önlemek için ilgili eğitimleri verebilirsiniz.

Öneriler: Makul bir PCR laboratuvarı kurmak, iyi bir PCR ortamını sürdürmek, standart PCR çalışma prosedürlerini formüle etmek ve deneyi yapanların titiz çalışma bilincini geliştirmek, PCR deneylerinin kirlenmesini önlemenin veya azaltmanın anahtarlarıdır.


Gönderim zamanı: 12 Ağustos 2021