• Facebook
  • Linkedin
  • Youtube

SOP Sistemi Oluşturma

Deney personelinin davranışını standart hale getirmek için PCR deney SOP'si oluşturun.

PCR ürünleri kontaminasyonunu önlemenin dört yolu1

Deneyciler, çalışma prosedürlerine sıkı sıkıya bağlı kalarak, insan faktörlerinden kaynaklanabilecek PCR kirliliğini minimuma indirir veya operasyonda kirlilik oluşmasını engeller.Ek olarak, deneyi yapan kişi, ilgili ekipmanı kullanma, tüm çalışma sürecini netleştirme, kontaminasyon arıtma yöntemleri ve laboratuvar kalite kontrol yöntemlerinde uzmanlaşma ve test sonuçlarını doğru şekilde yorumlayabilme dahil olmak üzere ilgili mesleki bilgi ve becerilere sahip olmalıdır.

Bina Standardı PCR Laboratuvarı

PCR ürünleri kontaminasyonunu önlemenin dört yolu2

PCR laboratuvarı prensipte reaktif hazırlama alanı, numune işleme alanı, amplifikasyon alanı ve amplifikasyon ürünü analiz alanı olmak üzere dört alana ayrılmıştır.İlk iki alan amplifikasyon öncesi alanlardır ve son iki alan amplifikasyon sonrası alanlardır.Ön amplifikasyon bölgesi ve amplifikasyon sonrası bölge kesinlikle ayrılmalıdır.Deney malzemeleri, reaktifler, kayıt kağıdı, kalemler, temizlik malzemeleri vb. yalnızca ön amplifikasyon alanından amplifikasyon sonrası alana yani reaktif hazırlama alanından, numune işleme alanından, amplifikasyon alanından ve amplifikasyon ürünü analiz alanından akabilir ve ters yönde akmamalıdır.Laboratuvardaki hava akımı da ters yönde değil, ön amplifikasyon alanından amplifikasyon sonrası alana doğru akmalıdır.

Deneysel adımları azaltın

Laboratuvar yalnızca PCR tespiti ve tanımlaması yapıyorsa, geleneksel PCR yerine floresan kantitatif PCR kullanılması önerilir.

PCR ürünleri kontaminasyonunu önlemenin dört yolu3

Floresans kantitatif PCR tespit sonuçları, floresan sinyallerle toplanabilir ve analiz edilebilir, bu nedenle reaksiyondan sonra elektroforez için kapağı açmaya gerek yoktur, bu da reaksiyon ürünlerinin aerosol oluşturmak üzere sızmasının neden olduğu PCR ürünlerinin kontaminasyonunu önler.Jel elektroforezinin yükleme adımı sırasında kapak açma sayısını artırırsanız, aerosol kontaminasyonu meydana gelebilir.Kantitatif PCR uygulamasının teşvik edilmesi ve kademeli olarak kalitatif PCR'nin yerini alması önerilir.

UNG kirlilik önleme sistemini benimseyin

PCR reaksiyonu için UNG anti-PCR ürünü kontaminasyon sistemi kullanılmaktadır.

Sistem dTTP yerine dUTP kullanır.PCR reaksiyonundan sonra, tüm PCR ürünleri (DNA fragmanları) dUTP ile birleştirilir;PCR reaksiyonunun bir sonraki turunda, sisteme eklenen UNG enzimi spesifik olabilen PCR'den önce 37°C'de 5 dakika inkübe edilir. dUTP içeren tüm DNA fragmanlarını parçalayın ve ardından PCR reaksiyonunu gerçekleştirin.Bu, PCR ürünlerinin neden olduğu aerosol kontaminasyonunu tamamen ortadan kaldırabilir.Etki aşağıdaki şekilde gösterilmiştir:

PCR ürünleri kontaminasyonunu önlemenin dört yolu4Not: Direkt PCR serisi için FJ Biotech'in anti-PCR ürün kirlilik sistemine ait seri ürünlerini seçebilirsiniz.

Tavsiye etmek

Büyük ölçekli genotip testi yapan laboratuvarlar için, makul laboratuvarların oluşturulmasına ek olarak reaktifleri test etmek için UNG anti-PCR ürün kontaminasyon sisteminin kullanılması şiddetle tavsiye edilir.

Hatırlatma: Bu sistemin kullanılması, halihazırda neden olmuş olan PCR ürünü kontaminasyonunu ortadan kaldıramaz.Bu nedenle UNG sistemi ilgili testin başında kullanılmalı ve PCR ürünlerinin kontaminasyonunu önlemek için PCR amplifikasyonu için her zaman UNG sistemi kullanılmalıdır.Yanlış pozitif.

Aşağıdakiler gibi büyük ölçekli testler yapılırken Forge Biotech'in Direct PCR-UNG sisteminin kullanılması önerilir: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Bitki Tohumu Direkt PCR Kiti-UNG;

Hayvan Dokusu Direkt PCR Kiti-UNG;

Fare Kuyruğu Doğrudan PCR Kiti-UNG;

Zebra Balığı Direkt PCR Kiti-UNG。

Foregene'nin bu kit serisi, yalnızca hızlı ve büyük ölçekte PCR saptaması yapmakla kalmaz, aynı zamanda PCR ürünü kontaminasyonunu da etkili bir şekilde önler ve kontrol eder.


Gönderim zamanı: 30 Temmuz 2021