• Facebook
  • Linkedin
  • Youtube

Yol göstermek

Uzun kodlamayan RNA, lncRNA, uzunluğu 200 nükleotitten fazla, genellikle 200-100000 nt arasında olan kodlamayan bir RNA'dır.lncRNA, epigenetik, transkripsiyon ve transkripsiyon sonrası seviyelerde gen ekspresyonunu düzenler ve X kromozomu susturma, genom baskısı ve kromatin modifikasyonu, transkripsiyon aktivasyonu, transkripsiyon girişimi, nükleer taşıma, hücre döngüsü düzenlemesi, hücre farklılaşması düzenlemesi ve doz dengeleme etkilerine (Doz dengeleme etkisi) ve diğer birçok önemli düzenleme sürecine katılır ve diğer birçok önemli düzenleme süreci, insan hastalıklarının oluşumu, gelişimi ve önlenmesi ile yakından ilişkilidir ve şu anda biyotıp alanındaki sıcak noktalardan biridir.

01  LncRNA'nın türleri ve özellikleri

haber723 (1)

lncRNA, yukarıdaki şekilde gösterildiği gibi, oluşumunun farklı kaynaklarına göre birçok türe ayrılır.Aşağıdaki özelliklere sahiptir:

1. lncRNA'lar, farklılaşma sırasında dinamik ifade ve farklı ekleme yöntemleriyle genellikle daha uzundur
2. Kodlayan genlerle karşılaştırıldığında, lncRNA genellikle daha düşük bir ifade düzeyine sahiptir
3. Çoğu lncRNA, doku farklılaşması ve gelişimi sürecinde bariz zamansal ve mekansal ifade özgüllüğüne sahiptir.
4. Tümörlerde ve diğer hastalıklarda karakteristik ifadeler vardır.
5. LncRNA'nın hücre altı konumları çeşitlidir
6. Dizinin korunumu düşüktür, ancak işlevin belirli bir derecede korunumu vardır, vb.

02 LncRNA Ters Transkripsiyonu Hakkında Sıkça Sorulan Sorular

Hücrelerdeki düşük lncRNA içeriği, uzun uzunluk ve yüksek seviyeli yapı nedeniyle, bu tür RNA'lar genellikle kök halkaları veya saç tokaları gibi karmaşık yapılara sahiptir ve RT-qPCR, başarısız ters transkripsiyon veya düşük verimlilik sorunlarına eğilimlidir.

03 LncRNA ters transkripsiyon çözümü

haber723 (2)

Merkezi kuralda, RNA virüslerinin kendi ters transkriptazlarını kullanarak RNA'yı bir şablon olarak kullanarak DNA sentezleme işlemine ters transkripsiyon denir.cDNA şablonunu in vitro sentezlemek için RNA virüsü ters transkriptaz kullanma işlemine ters transkripsiyon denir.Ters transkripsiyon sistemine dahil olan ana unsurlar: RNA şablonu, ters transkriptaz, primerler ve diğer bileşenler.

1.RNA şablonu

RNA şablonunun ters transkripsiyon üzerindeki etkisi, yapısına, saflığına ve bütünlüğüne yansır.Ekstre edilen RNA'nın saflığı ve bütünlüğü ne kadar yüksek olursa, ters transkripsiyonun etkinliği o kadar yüksek olur ve müteakip kantitatif sonuçlar o kadar doğru olur.Yaygın olarak kullanılan RNA ekstraksiyon reaktifleri ile saflaştırılan RNA, genellikle çoğu ters transkriptaz üzerinde güçlü bir inhibitör etkiye sahip olan alkol ve guanidin tuzlarının kalıntılarını içerir.

2. Ters transkriptaz

Ters transkriptaz, tüm ters transkripsiyon sisteminde önemli bir etkiye sahiptir.Çoğu laboratuvarda kullanılan ters transkriptaz için uygun sıcaklık genellikle 42°C'dir.Aslında, yüksek seviyeli RNA yapısının açılması daha yüksek bir sıcaklık gerektirir ve ters transkriptaz için gereksinimler daha yüksektir.

3.Astar

Ters transkripsiyon primerleri, gene özgü primerleri, rastgele primerleri ve Oligo dT primerlerini içerir.Çoğu lncRNA, polyA kuyrukları içermez ve rastgele primerleri Oligo dT ile uygun şekilde eşleştirmek önemlidir.

4.Diğer bileşenler

RNA'nın parçalanmasının özellikle kolay olduğu gerçeği göz önüne alındığında, ters transkripsiyon sistemine bileşenlerin girmesi en aza indirilebilir, bu da RNaz'ın girişini etkili bir şekilde önleyebilir ve ters transkripsiyonun düzgün ilerlemesini sağlayabilir.

ForojenRNA şablonundan elde edilir, qPCR'ye ters transkripsiyon

lncRNA saptamanıza kapsamlı bir şekilde eşlik edin

haber723 (3)

Hayvan Toplam RNA IteselliKit (gDNA çıkarma sütunlu)

haber723 (4)

Hücre Toplam RNA IteselliKit (gDNA çıkarma sütunlu)

haber723 (5)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase ile)(lncRNA'dan birinci sarmal cDNA sentezi için Süper Premiks)

haber723 (6)

Gerçek Zamanlı PCR EasyTM-SYBR Yeşil I

Aavantajlar ofRNA ekstraksiyonu:

Kit, üçüncü nesil RNA ekstraksiyon teknolojisini kullanır, DNaz kullanmaya gerek yoktur.

96, 24, 12 ve 6 oyuklu plaka kültürlü hücrelerden 11 dakika, gDNA'sız, yüksek saflıkta, yüksek kaliteli toplam hücre RNA'sının yüksek verimli ekstraksiyonu.

LncRNA ters transkripsiyonunun avantajları:

Genomik DNA kontaminasyonunu hızlı bir şekilde ortadan kaldırmak için LncRNA için özel olarak geliştirilmiş bir ters transkripsiyon sistemi.

Ters transkripsiyon sistemi yüksek termal kararlılığa sahiptir ve 50°C'de hala iyi bir ters transkripsiyon performansına sahiptir.

Yüksek GC içeriğine ve karmaşık ikincil yapıya sahip şablonlar, yüksek verimlilikle tersine çevrilebilir.

Avantajlarof qPCR:

Sıcak başlatma Foregene Taq Polimeraz daha yüksek amplifikasyon verimliliğine, daha yüksek amplifikasyon hassasiyetine ve daha yüksek amplifikasyon özgüllüğüne sahiptir

Optimize edilmiş Real PCR Easy Mix, SYBR Green I'in daha yüksek saptama hassasiyetine sahip olmasını sağlar ve flüoresan yoğunluğu, farklı flüoresan kantitatif deney türlerinin ihtiyaçlarını karşılayabilen benzer ürünlerin 3-5 katıdır.


Gönderim zamanı: 23 Temmuz 2021