• Facebook
  • Linkedin
  • Youtube

Düşük A260/A230 oranı genellikle 230nm'de maksimum absorpsiyon dalga boyuna sahip safsızlıklardan kaynaklanır.Bu safsızlıkların neler içerdiğini görelim:

  • Yaygın kirleticiler

    soğurma dalga boyu

    oran etkisi

    Protein

    ~230nm ve 280nm

    A'nın aynı anda azaltılması260/A 280ve bir260/A 280oranlar

    Guanidin tuzu

    220-240 deniz mili

    A'yı azaltın260/A 280oran

    Fenol

    ~270nm

    -

    Trizol

    ~230nm ve 270nm

    A'yı azaltın260/A 280oran

    EDTA'lı

    ~230nm

    A'yı azaltın260/A 280oran

    etanol

    230-240 mil

    A'yı azaltın260/A 280oran

 
 
 
Yaygın kirleticilerin absorpsiyon dalga boyu ve kontrast değeri

Prutin kontaminasyon
Protein kirliliği, nükleik asit ekstraksiyon işleminde en yaygın kirlilik olarak kabul edilebilir.Protein, üst sulu faz ile alt faz arasında bulunur.organikfaz .Kirlilik aynı anda A260/A280 ve A260/A230 oranını azaltacak ve A260/A230 oranı A260/A280 oranından daha belirgin bir şekilde değişecektir.
müteakip sırasındaters transkripsiyonor qPCR reaksiyonları, protein kalıntıları enzim fonksiyonunu inhibe edebilir veya engelleyebilir.Protein kontaminasyonundan kaçınmanın en iyi yolu, süpernatant aspire edilirken “çok yerine az, birçok kez küçük bir miktar” ilkesini akılda tutmaktır.

2. Guanidinyum kirliliği
hidroklorür (GuHCl) ve guanidin tiyosiyanat (GTC), nükleik asit ekstraksiyon işlemi sırasında hücre zarlarını hızlı bir şekilde tahrip edebilen, protein denatürasyonuna ve çökelmesine neden olan denatüre edici proteinlerin etkisine sahiptir.GuHCl ve GTC'nin absorpsiyon dalga boyu 220-240 nm arasındadır veArtık guanidinyum tuzu A260/A230 oranını azaltacaktır..Kalıntı guanidinyum tuzu oranı azaltsa da,sonraki deneyler üzerindeki etki aslında önemsizdir.

3. Trizol kontaminasyonu
Trizol'ün ana bileşeni fenoldür.Fenolün ana işlevi, hücreleri parçalamak ve hücrelerdeki proteinleri ve nükleik asit maddelerini serbest bırakmaktır.Fenol, proteinleri etkili bir şekilde denatüre edebilmesine rağmen, RNaz aktivitesini tamamen inhibe edemez.Bu nedenle, endojen ve eksojen RNaz'ı inhibe etmek için TRIzol'e 8-hidroksikinolin, guanidin izotiyosiyanat, β-merkaptoetanol vb.
Trizol, hücresel RNA'yı ekstrakte ederken, hücreleri hızla parçalayabilir ve hücrelerden salınan nükleazı inhibe edebilir ve kalıntı Trizol, A260/A230 oranını önemli ölçüde azaltacaktır.
İşleme yöntemi: Santrifüj yapılırken, Trizol'deki fenolün 4° ve oda sıcaklığında su fazında kolaylıkla çözünebildiğine dikkat edilmelidir.

4. etanol kalıntısı
Etanol, DNA'ya bağlı olabilecek tuz iyonlarını çözerken DNA'yı çökeltmek için son işlemde kullanılır.En yüksek absorpsiyon dalga boyuabsorpsiyon zirvesietanol de 230-240 nm'dedir, bu daA260/A230 oranını da düşürür.
Etanol tortusundan kaçınma yöntemi, son elüsyon sırasında iki kez tekrarlanabilir;davlumbazelüsyon için tampon eklemeden önce etanolün tamamen buharlaşmasına izin vermek için iki dakika boyunca.
Ancak bilinmelidir ki oran sadece RNA kalitesinin bir değerlendirme indeksidir.Yukarıda belirtilen işlemler sıkı bir şekilde düzenlenirse, oran ve standart aralık arasındaki sapmanın sonraki deneyler üzerinde büyük bir etkisi olmayacaktır.
İlgili ürünler:
Hayvan Toplam RNA İzolasyon kiti
Bitki Toplam RNA İzolasyon kiti
Hücre Toplam RNA İzolasyon kiti
Bitki Toplam RNA İzolasyon kiti Plus


Gönderim zamanı: 10 Şubat 2023