Giriiş:

RNA molekülleri, protein, DNA ve RNA gibi diğer biyolojik moleküllerle geniş ölçüde etkileşime girebilir ve bu nedenle hücrelerde ve organizmalarda makromoleküler kompleksler şeklinde bulunur.Bunlar arasında RNA-protein kompleksleri, RNA'nın varlığı ve işlevinin önemli biçimlerinden biridir.RNA pull-down, RNA moleküllerini, özellikle de lncRNA moleküllerinin etkileşen proteinlerini taramak ve tanımlamak için kullanılan klasik bir yöntemdir ve araştırmacıların ve uluslararası yetkili akademik dergilerin çoğu tarafından tanınmaktadır.Bugün FORREGENE sizinle RNA aşağı çekmenin deneysel prensibini ve teknik sürecini paylaşacak, belki siz de kullanabilirsiniz.

1. RNA çekme teknolojisinin deneysel prensibi:

Biyotin etiketli hedef lncRNA veya lncRNA fragmanlarının (pozitif ve negatif kontroller olarak kullanılan RNA fragmanları dahil) in vitro transkripsiyonu ve sentezi ve hücre özleri ile inkübe etme;RNA-protein veya RNA-RNA komplekslerini toplamak için avidin bağlantılı manyetik boncuklar kullanın. İyice yıkandıktan sonra kompleks ayrıştırılır.lncRNA ile etkileşime giren protein hedef molekülü tespit ediliyorsa, RNA çekme ürünü üzerinde protein elektroforezi gerçekleştirin, hedef proteini gümüş boyama ile tespit edin ve kütle spektrometrisi için jeli kesin;ayrıca açılan ürün üzerinde doğrudan western blot doğrulaması gerçekleştirin;tespit edilirse lncRNA ile etkileşime giren RNA hedef molekülleri için, RNA-pull down ürünleri RNA ekstraksiyonuna tabi tutulur ve spesifik qRT-PCR tespiti gerçekleştirilir.

2. RNA çekme teknolojisi deney süreci:

3. FOREGENE'in RNA çekmesi için teknik servis:

Hücre kültürü

Hücre toplamı/nükleer/plazma protein ekstraktının hazırlanması

RNA aşağı çekme deneyi

SDS-PAGE elektroforezi, gümüş boyama

Kütle spektrometresi ve WB deneyleri

deneysel rapor

4. Deneysel durum

Aşağıdaki şekil, FJ Bio-Bio'nun RNA çekmesinin ve kırmızı okun fark bandını işaretlediği SDS-PAGE elektroforez tespitinin sonuçlarını göstermektedir:

Sichuan Üniversitesi'nden Profesör Song Xu'nun araştırma grubu, lncRNA araştırması alanında 15 yıllık uzun vadeli birikim biriktirdi.Foregene Bio ve Profesör Song Xu'nun araştırma grubu, deneyiniz için size tatmin edici bir sonuç verecek olan lncRNA'nın RNA aşağı çekme teknolojisini başlatmak için işbirliği yaptı.