Nükleik asit test laboratuvarlarında PCR yöntemleri ve nükleik asit aerosol kontaminasyonu bir madalyonun iki yüzü gibidir.Sadece ona sahip olmayı ya da olmamayı seçebiliriz ama onu isteyip harcamamayı seçemeyiz.

1. DNA çıkarıcının taranması

Nükleik asit aerosol kontaminasyonunun uzamsal olarak uzaklaştırılmasını sağlamak için, ilk önce sıvı haldeki nükleik asitleri çıkarabilen DNA çıkarıcıların taranması gerekir.Çünkü gerçekten işe yarayan çok fazla DNA sökücü yok.Deneysel yöntem için lütfen bakınız: DNA sökücü laboratuvarın "gizli köşesi" olamaz!

Bu deneyde, dijital PCR ile miktarı belirlenen 100 kopya/μL (CT yaklaşık 31) ASFV plazmidi ve DNA sökücü eşit hacimlerde karıştırıldı ve ardından oda sıcaklığında sırasıyla 10 dakika, 20 dakika ve 30 dakika reaksiyona sokuldu.Nükleik asit ekstraksiyonundan sonra, qPCR amplifikasyonu gerçekleştirildi.Plazmit ve su ile karıştırılmış bir pozitif kontrol karşılaştırıldı.Deney aynı anda tamamlanmadığı için sonuçlar arasında belli bir sapma olabilir ancak bu deneyin sonucunu etkilemez.Şimdiye kadar 10 ticari DNA sökücü ürünü değerlendirdim.Yalnızca No. 1, No. 6 ve No. 8 ürünleri, sıvı haldeki plazmid DNA'yı etkili bir şekilde bozabilir.Diğer ürünlerin neredeyse hiç etkisi yoktur.

Tablo 1 Piyasada bulunan DNA gidericinin nükleik asit giderme etkisi

2. Yaygın olarak kullanılan dezenfektanların DNA uzaklaştırma etkisi deneyi

1. Yaygın olarak kullanılan dezenfektanların taranması

Laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılan birçok dezenfektan türü vardır: aldehitler, fenoller, alkoller, kuaterner amonyum tuzları, peroksitler, klor müstahzarları ve asitler ve bazlar.Bu dezenfektanların mikroorganizmalar üzerindeki dezenfeksiyon etkileri deneylerle tam olarak doğrulanmıştır, ancak nükleik asitlerin bozunma etkisine ilişkin yeterli deneysel veri yoktur.Nükleik asit test laboratuvarları, yalnızca mikroorganizmalar üzerinde iyi bir dezenfeksiyon etkisine sahip olmakla kalmayıp aynı zamanda DNA'yı da bozabilen bir dezenfektana ihtiyaç duyar.Test sonuçları, 84 dezenfektan ve trikloroizosiyanürik asit ve 1 M hidroklorik asitten oluşan yalnızca iki klor preparatının gereksinimleri karşıladığını göstermektedir.1 M hidroklorik asit oldukça aşındırıcı olduğundan, nükleik asit test laboratuvarlarında atık bertarafı olarak klor müstahzarlarının kullanılması önerilir.Bununla birlikte, klor müstahzarları metaller için aşındırıcıdır ve aletlerin ve ekipmanların dezenfeksiyonunda kullanılamaz.

Tablo 2 Farklı dezenfektan türlerinin DNA giderim etkileri

2. Klor müstahzarlarının minimum etkili konsantrasyonu

Klor bazlı dezenfektanların güçlü bir DNA bozunma etkisi vardır, ancak metal aşındırıcılıkları ve tahrişleri nedeniyle zemini, metal olmayan tezgahları, ıslatma uçlarını, santrifüj tüplerini ve diğer test öğelerini temizlemek için kullanılabilirler.

“Yeni Koroner Pnömoni Salgını Dezenfeksiyon Teknik Yönergeleri”ne göre: Kirleticiler (hastaların kanı, salgıları ve kusmukları) mevcut klor 5g/L-10g/L klor içeren dezenfektan;zeminler, duvarlar ve nesne yüzeyleri mevcut klor 1g/L'yi kullanır Klor dezenfektanı: giysiler, yatak takımları ve diğer tekstil ürünleri önce 0,5g/L mevcut klor içeren klor dezenfektana 30 dakika süreyle batırılır ve ardından her zamanki gibi temizlenir.

Tablo 3 Farklı klor dezenfektan konsantrasyonlarının DNA giderme etkisi

Test sonuçları şunu göstermektedir: Etkili klor konsantrasyonu 1,2 g/L'ye eşit veya daha yüksek olduğunda, klor içeren dezenfektan 5 dakika boyunca kullanıldığında 100 kopya/μL plazmiti tamamen bozabilir.10 dakika etki gösterdiğinde, 0,6 g/L'ye eşit veya daha yüksek etkili klor konsantrasyonuna sahip 84 dezenfektan, 100 kopya/μL plazmidi tamamen bozabilir.

3. Nükleik asit aerosolü ile kirlenmiş hava giderme deneyi

Nükleik asit aerosolleri ile kirlenen hava nasıl temizlenir?Düşüncelerin çoğu, aerosolle kontamine olmuş bir ortam yaratmak ve sonra onu temizlemek veya kontaminasyondan sonra nükleik asitleri temizlemektir.Benim için tekrarlanamayan ve deneyin sonuçları nicel olarak analiz edilemeyen bir deney anlamsızdır, bu yüzden bazı dezenfektan hava dezenfeksiyonu yöntemlerini ödünç aldım.Bkz. "GB27948-2020 Hava Dezenfektanları için Genel Gereklilikler" ve "Dezenfeksiyon Teknik Spesifikasyonları"

1. Test malzemeleri

1.1 DNA sökücü: Bu deneyde, Tablo 1'deki ticari olarak temin edilebilen iki DNA sökücü 6 ve 8 seçildi.

1.2 Test plazmidi: Çoğu laboratuvar kirliliğinin CT değerinin 30'dan yüksek olacağı düşünülürse, bu kez kullanılan ASFV gen plazmitinin konsantrasyonu yaklaşık 100 kopya/μL'dir ve floresan kantitatif PCR CT'si yaklaşık 31.07'dir.Plazmidi akın eden pamuklu çubuğa ekleyin ve havayla kurutun.

1.3 Test aleti: Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd. tarafından nazikçe desteklenen Bilingkehan KVBOX dezenfeksiyon aleti, hidrojen peroksit dezenfektanla mükemmel hava dezenfeksiyon performansına sahiptir ve sporları ve diğer mikroorganizmaları etkili bir şekilde öldürebilir.

1.4 Test alanı: yaklaşık 0,1 metreküplük kapalı bir transfer penceresi.

2. Test yöntemi

Dezenfeksiyon makinesinde ayarlanan dezenfektan miktarı 10 ml'dir ve konsantrasyon 100 ml/m3'tür, bu da "GB27948-2020 Hava Dezenfektanları için Genel Gereklilikler"den çok daha yüksektir: aerosol sprey dezenfeksiyon kullanılırken, dezenfektan miktarı ≤10 ml/m3 olmalıdır