Problem Analizi Rehberi

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Düşük verim veya DNA yok

Numunenin kaynağı, numunenin yaşı, numunenin saklanma koşulları ve operasyon dahil olmak üzere genellikle genomik DNA'nın verimini etkileyen birçok faktör vardır.

Ekstraksiyon sırasında genomik DNA elde edilemedi

1. Doku numuneleri uygun şekilde saklanmaz veya çok uzun süre saklanır, bu da genomik DNA'nın bozulmasına neden olur.

Öneri: Doku örneklerini sıvı nitrojende veya -20°C'de saklayın°C;genomik DNA ekstraksiyonu için yeni toplanan örnekleri kullanmayı deneyin.

2. Çok az numune miktarı ilgili genomik DNA'nın ekstrakte edilmemesine neden olabilir.

Öneri: Uzun süre saklanmış veya ciddi genomik DNA bozulmasına sahip doku örnekleri için, önemli ölçüde genomik DNA elde etmek için doku örneklerinin miktarı uygun şekilde artırılabilir.DNA ihtiyacına göre numune miktarı belirlenebilir ancak taze numune 100 mg'ı, kuru numune 30 mg'ı geçmemelidir.

3. Numune sıvı nitrojenle öğütülmemiş veya sıvı nitrojenden sonra çok uzun süre yerleştirilmemiş.

Öneri: DNA ekstraksiyonu sırasında, hücre duvarını kırmak için numunenin tamamen sıvı nitrojen ile öğütülmesi gerekir;Öğütmeden sonra, lütfen numune tozunu 65°C'de önceden ısıtılmış PL1'e aktarın.°C mümkün olan en kısa sürede (öğütülmüş toz eridiğinde, genomik DNA hızla bozulmaya başlayacaktır).

4. Foregene Protease'in uygun olmayan şekilde saklanması aktivitenin azalmasına veya inaktive olmasına neden olur.

Öneri: Foregene Protease saklama koşullarını onaylayın veya enzimatik hidroliz için yeni bir Foregene Protease ile değiştirin.

5. Kit yanlış bir şekilde saklanmış veya çok uzun süre saklanmış, bu da kitteki bazı bileşenlerin bozulmasına neden olmuştur.

Öneri: İlgili işlemler için yeni bir bitki genomik DNA ekstraksiyon kiti satın alın.

6. Kitin uygunsuz kullanımı.

Öneri: Bitki genomik DNA'sının ekstraksiyonu ve saflaştırılması için numunelere ayrılmış bir Bitki DNA İzolasyon Kiti satın alın.

7. WB'yi eklemeden arabelleğe alınsusuz etanol.

Öneri: Tampon WB'ye doğru hacimde mutlak etanol eklediğinizden emin olun.

8. Eluent silika membran üzerine doğru şekilde damlatılmamış.

Öneri: Önceden ısıtılmış elüenti 65'te ekleyin℃silika jel membranın ortasına damlatın ve elüsyon etkinliğini artırmak için 5 dakika oda sıcaklığında bırakın.

Düşük verimli genomik DNA elde etmek için ekstraksiyon

1. Numunenin uygun şekilde saklanmaması veya çok uzun süre saklanması, genomik DNA'nın bozulmasına neden olur.

Öneri: Doku örneklerini -20'de saklayın℃;genomik DNA ekstraksiyonu için yeni toplanan doku örneklerini kullanmayı deneyin.

2. Doku örneklerinin miktarı çok küçükse, çıkarılan genomik DNA daha az olacaktır.

Öneri: Bazı bitki örnekleri su açısından zengindir, örneğin algler gibi su bitkileri, dozaj uygun şekilde artırılabilir veya işlemden önce su biraz kurutulabilir.

3. Numuneler, sıvı nitrojen ile tamamen öğütülmemiş veya öğütüldükten sonra oda sıcaklığında çok uzun süre bırakılmıştır.

Öneri: Sıvı nitrojen öğütme yeterli olmalı ve numune hücre duvarı mümkün olduğunca kırılmalıdır;Öğütmeden hemen sonra, numune tozu 65 ° C'ye aktarılmalıdır.℃sonraki adım için önceden ısıtılmış Tampon PL1.

4. Doğru kiti kullanmamak.

Öneri: Bitki genomik DNA'sını çıkarmak ve saflaştırmak için özel bir Bitki DNA İzolasyon Kiti kullanın.

5. Foregene Protease'in uygun olmayan şekilde saklanması aktivitenin azalmasına veya inaktive olmasına neden olur.

Öneri: Foregene Protease saklama koşullarını onaylayın veya enzimatik hidroliz için yeni bir Foregene Protease ile değiştirin.

6. Eluent sorunu

Öneri: Lütfen elüsyon için Tampon EB kullanın;ddH kullanılıyorsa₂O veya diğer elüentler, elüentin pH'ının 7,0-8,5 arasında olduğundan emin olun.

7. Eluent doğru şekilde damlatılmamış

Öneri: Lütfen elüsyon damlasını silika membranın ortasına ekleyin ve elüsyon etkinliğini artırmak için 5 dakika oda sıcaklığında bırakın.

8. Eluent hacmi çok küçük

Öneri: Lütfen genomik DNA elüsyonu için elüenti talimatlara göre kullanın, en az 100ul.

Düşük saflıkta ekstre edilmiş genomik DNA

Genomik DNA'nın düşük saflığı, aşağı akış deneylerinin başarısızlığına veya zayıf etkisine yol açacaktır, örneğin: enzim kesilemez ve hedef gen fragmanı PCR ile elde edilemez.

1. Çeşitli protein kontaminasyonu, RNA kontaminasyonu.

Analiz: Tampon PW kolonu yıkamak için kullanılmadı;Tampon PW, kolonu doğru santrifüjleme hızında yıkamak için kullanılmadı.

Öneri: süpernatan kolondan geçirildiğinde süpernatanda çökelme olmamasını sağlamaya çalışın;saflaştırma kolonunu Tampon PW ile talimatlara göre yıkadığınızdan emin olun ve bu adım atlanamaz.

2. Safsızlık iyon kirliliği.

Analiz: Tampon WB yıkama kolonu çıkarıldı veya yalnızca bir kez yıkandı, bu da artık iyonik kontaminasyona neden oldu.

Öneri: Kalıntı iyonları olabildiğince gidermek için talimatlara göre Tampon WB ile iki kez yıkadığınızdan emin olun.

3. RNaz kontaminasyonu.

Analiz: Eksojen RNaz, Tampon'a eklenir;Tampon PW'de yanlış yıkama işlemi, artık RNaz ile sonuçlanacak ve in vitro transkripsiyon gibi aşağı akış RNA deneysel işlemlerini etkileyecektir.

Öneri: Foregene serisi nükleik asit ekstraksiyon kitleri, ilave RNaz olmadan RNA'yı uzaklaştırabilir ve Bitki DNA İzolasyon Kitindeki tüm reaktifler RNaz'a ihtiyaç duymaz;saflaştırma kolonunu Tampon PW ile talimatlara göre yıkadığınızdan emin olun ve bu adım atlanamaz.

4. Etanol kalıntıları.

Analiz: Saflaştırma kolonunu Tampon WB ile yıkadıktan sonra boş tüp santrifüjü yapılmadı.

Öneri: Uygun boş tüp santrifüjü için talimatları izleyin.

Kullanım klavuzu:

Bitki DNA İzolasyon Kiti Kullanım Kılavuzu