Bitki Toplam RNA İzolasyon Kiti Düşük Polisakkaritler ve Polifenoller İçin Bitki Toplam RNA Saflaştırma Kiti
Özellikler
50 Hazırlık, 200 Hazırlık
Kit, düşük polisakkarit ve polifenol içeriğine sahip çeşitli bitki dokularından yüksek saflıkta ve yüksek kaliteli toplam RNA'yı verimli bir şekilde çıkarabilen Foregene tarafından geliştirilen spin kolonu ve formülü kullanır.Yüksek polisakkarit veya polifenol içeriğine sahip bitki numunelerinde, daha iyi RNA ekstraksiyon sonuçları elde etmek için Plant Total RNA Isolation Plus Kitinin kullanılması önerilir.Kit, genomik DNA'yı süpernatandan ve doku lizatından kolayca çıkarabilen DNA-Temizleme kolonu sağlar.Yalnızca RNA sütunu, RNA'yı etkili bir şekilde bağlayabilir.Kit, aynı anda çok sayıda örneği işleyebilir.
Tüm sistem RNaz içermez, bu nedenle saflaştırılmış RNA bozulmaz.Tampon PRW1 ve Tampon PRW2, elde edilen RNA'nın protein, DNA, iyonlar ve organik bileşikler tarafından kontamine olmamasını sağlayabilir.
Kit bileşenleri
| Tampon PSL1, Tampon PS, Tampon PSL2 |
| Tampon PRW1, Tampon PRW2 |
| RNaz İçermeyen ddH2O, DNA Temizleme Kolonu |
| Yalnızca RNA Sütunu |
| Talimatlar |
Özellikler ve avantajlar
■ Tüm süreç boyunca oda sıcaklığında (15-25°C), buz banyosu ve düşük sıcaklıkta santrifüjleme olmadan çalıştırma.
■ RNaz İçermeyen eksiksiz kit, RNA bozulması konusunda endişelenmenize gerek yok.
■ DNA Temizleme Sütunu spesifik olarak DNA'ya bağlanır, böylece kit, DNaz eklemeden genomik DNA kontaminasyonunu giderebilir.
■ Yüksek RNA verimi: Yalnızca RNA Sütunu ve benzersiz formül, RNA'yı verimli bir şekilde saflaştırabilir.
■ Yüksek hız: çalıştırması kolaydır ve 30 dakikada tamamlanabilir.
■ Güvenlik: organik reaktif gerekmez.
■ Yüksek kalite: Saflaştırılmış RNA fragmanları yüksek saflıkta olup, protein ve diğer safsızlıklar içermez ve çeşitli aşağı yönlü deneysel uygulamaları karşılayabilir.
Kit uygulaması
Düşük polisakkarit ve polifenol içeriğine sahip taze veya dondurulmuş bitki doku örneklerinden (özellikle taze bitki yaprak dokusu) toplam RNA'nın ekstraksiyonu ve saflaştırılması için uygundur.
iş akışı
Diyagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus, 50 mg taze polisakkarit ve polifenol yaprağını işledi ve %5 saflaştırılmış RNA, elektroforez ile test edildi.
1: Muz
2: Ginkgo
3: Pamuk
4: Nar
Depolama ve raf ömrü
Kit, kuru ortamda oda sıcaklığında (15–25 ℃) 12 ay ve daha uzun süre (24 ay) 2–8 ℃ saklanabilir.
Tampon PSL1, 2-hidroksi-1-etanetiyol (isteğe bağlı) eklendikten sonra 1 ay boyunca 4 °C'de saklanabilir.
Problem Analizi Rehberi
Karşılaşabileceğiniz sorunların aşağıdaki analiziBitki ToplamıRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Döndürme sütunu tıkalı
Döndürme kolonunun bloke edilmesi RNA veriminin düşmesine hatta RNA elde etmek için saflaştırılamamasına ve elde edilen RNA'nın kalitesinin düşük olmasına neden olacaktır.
Yaygın Neden Analizi:
1. Numune tamamen kırılmamış.
Eksik numune parçalanması, RNA verimini ve kalitesini de etkileyebilen DNA Temizleme Kolonunu bloke edebilir.Numune parçalama işlemini gerçekleştirirken, numunelerin hücre duvarları ve hücre zarları gibi dokuları mümkün olduğunca parçalamak için yeterli miktarda sıvı nitrojeni hızlı bir şekilde öğütmenizi öneririz.Polifenol polisakkaritlerin bitki numuneleri için Plant Total RNA Isolation Kit Plus kullanmanızı öneririz.
2. DNA-Temizleme Sütunu izole süpernatanını aspire edin, olası hücre kalıntısı topaklarını aspire edin.
Aspire edilen hücre enkaz peleti, RNA adsorpsiyon prosedürleri sırasında yalnızca RNA Sütununu tıkayabilir (prosedürün 5. adımına, polisakarit polifenol prosedürünün 6. adımına bakın).Hücre kalıntılarının aspire edilmesini önlemek için bu süpernatanı aspire ederken dikkatli olunmasını öneririz.
3. İlk numune miktarı çok fazla.
Aşırı örnek kullanımı, tam olmayan örnek parçalanmasına veya hücrelerin Tampon PRL1 veya Tampon PSL1 tarafından eksik parçalanmasına neden olarak saflaştırma işlemleri için tıkanmış bir saflaştırma sütununa neden olur.Plant Total RNA İzolasyon Kiti, çalıştırılan bir numunenin tek bir saflaştırması için başlangıçta maksimum 50 mg'a sahiptir.Polifenol polisakkaritlerin bitki örnekleri için, Plant Total RNA Isolation Kit Plus'ı denemenizi öneririz.
4. Santrifüjün sıcaklığı çok düşük.
Numune dokusunun sıvı nitrojenle parçalanması haricinde tüm RNA izolasyonu ve saflaştırması, tüm adımlar oda sıcaklığında (20-25 °C) gerçekleştirilir.Bazı düşük sıcaklıklı santrifüjler 20 °C'nin altında sıcaklıklara sahiptir, bu da DNA Temizleme Kolonunda ve/veya sadece RNA Kolonunda tıkanıklıklara neden olabilir.Bu meydana gelirse, santrifüj sıcaklığını 20-25 °C'ye ayarlayın ve lizis karışımını ve/veya etanol ayırma süpernatanı ilavesini 37 °C'ye önceden ısıtın.
Ekstrakte RNA yok veya RNA verimi düşük
Genellikle geri kazanım verimliliğini etkileyen birçok faktör vardır, örneğin: numune RNA içeriği, çalıştırma yöntemi, elüsyon hacmi, vb.
Yaygın nedenlerin analizi aşağıdaki gibidir:
1.İşlem sırasında bir buz banyosu veya düşük sıcaklıkta (4°C) santrifüjleme yapılmıştır.
Öneri: Tüm işlemi oda sıcaklığında (15-25°C) çalıştırın, buz banyosu ve düşük sıcaklıkta santrifüjleme yapmayın.
2.Numunenin uygun olmayan şekilde muhafaza edilmesi veya numunenin uzun süreli muhafaza edilmesi nedeniyle RNA bozulmuştur.
Öneri: Taze toplanmış numuneler, sıvı nitrojen içinde hızlı bir şekilde dondurulmalı ve daha sonra -80°C'de uzun süre saklanmalı, numunelerin tekrar tekrar dondurulup çözülmesinden kaçınılmalıdır;veya numuneleri hemen RNA stabilizatörü RNAsonraki çözeltiye (hayvan numuneleri) batırın.
3.Yetersiz numune parçalanması ve lizis, saflaştırma kolonunun tıkanmasına neden olur.
Öneri: Dokuyu öğütürken, lütfen dokunun yeterince öğütülmüş olduğundan emin olun ve hızlı bir şekilde önceden hazırlanmış Tampon PSL1'e aktarın (doğru oranda β-ME eklendiğini onaylayın, prosedürün 1. adımına bakın).
4. Eluent yanlış eklendi.
Öneri: RNaz İçermeyen ddH'nin olduğundan emin olun2O, saflaştırma kolonu zarının ortasına damlatılır.
5. Doğru hacimde mutlak etanol PSL2 Tamponuna veya Tampon PRW2'ye eklenmedi.
Öneri: Lütfen talimatları izleyin, Buffer PSL2 ve Buffer PRW2'ye doğru hacimde mutlak etanol ekleyin ve kit kullanılmadan önce iyice karıştırın.
6. Doku örneği miktarı uygun değil.
Öneri: 500 μl Buffer PSL1 başına 50 mg doku kullanın.Çok fazla doku kullanılması, ekstrakte edilen RNA miktarını azaltacak ve elde edilen RNA'nın saflığı da azalacaktır.İlk numune dozunun, RNA ekstraksiyon işlemi başına 50 mg'ı geçmemesini şiddetle tavsiye ederiz.
7. Uygun olmayan elüsyon hacmi veya eksik elüsyon.
Öneri: Saflaştırma kolonunun elüent hacmi 50-200 µl'dir;elüsyon etkisi tatmin edici değilse, önceden ısıtılmış RNase-Free ddH eklendikten sonra sürenin oda sıcaklığında uzatılması önerilir.2O, 5-10dk gibi.
8. Arıtma kolonunda PRW2 Tamponu ile yıkandıktan sonra etanol kalıntısı bulunur.
Öneri: Boş tüp 1 dakika santrifüjlenirse ve PRW2 Tamponunda yıkandıktan sonra hala etanol kalırsa, boş tüp santrifüjleme süresini 2 dakikaya çıkarabilirsiniz veya kalan etanolü tamamen çıkarmak için saflaştırma kolonunu 5 dakika oda sıcaklığında tutabilirsiniz.
9.Kit yanlış kullanılmış.
Öneri: Polifenolik polisakkaritlerin bitki numuneleri için, Bitki Toplam RNA İzolasyon Kiti gibi yaygın kitlerin kullanılması ideal RNA numunelerini elde edemeyebilir.Polifenolik polisakkarit bitki numuneleri için özel olarak tasarlanmış Plant Total RNA IsolationKit Plus kullanmanızı tavsiye ederiz.Polifenol ve polisakkarit bitki örneklerinden RNA ekstraksiyonu için özel olarak geliştirilmiş bir kit.
OD260/OD280 değeri düşük
ddH ile RNA elüsyonu2O ve spektrofotometre okumaları için kullanıldığında, düşük OD260/OD280 değerleri ile sonuçlanır.10 mM Tris-HCl, pH 7,5 kullanmanızı öneririz (RNaz İçermeyen ddH yerine2Nispeten doğru OD260/OD280 değerleri elde etmek için O, RNA'yı elute etmek için) bkz. "RNA Konsantrasyon ve Saflaştırma Testleri", sayfa 19.
Saflaştırılmış RNA bozulur
Saflaştırılmış RNA'nın kalitesi, örneğin korunması, RNaz kontaminasyonu ve manipülasyon gibi faktörlerle ilişkilidir.
Yaygın nedenlerin analizi:
1.Doku örnekleri toplandıktan sonra zamanında saklanmadı.
Öneri: Doku örnekleri toplandıktan sonra zamanında kullanılmayacaksa, lütfen bunları hemen düşük sıcaklıkta sıvı nitrojende saklayın veya sıvı nitrojende hızlı dondurduktan sonra uzun süreli saklama için -80°C'ye aktarın veya numuneleri hemen RNA stabilizatör RNAlater solüsyonuna (hayvan numuneleri) daldırın.RNA ekstraksiyonu için taze toplanmış doku örneklerini kullanmayı deneyin.
2. Doku örneklerinin tekrar tekrar dondurulması ve çözülmesi.
Öneri: Doku örneklerini saklarken, korumak için küçük parçalara ayırmak ve örneklerin tekrar tekrar dondurulup çözülmesinden kaynaklanan RNA bozulmasını önlemek için bunları kullanırken bir kısmını çıkarmak en iyisidir.
3.RNase ameliyathanede tanıtılan veya giyilmeyen tek kullanımlık eldiven, maske vb.
Öneri: RNA ekstraksiyon deneyleri en iyi şekilde ayrı RNA işlemlerinde gerçekleştirilir ve deneyden önce laboratuvar masası temizlenmeli ve RNaz'ın girmesinden kaynaklanan RNA bozunmasını büyük ölçüde önlemek için deney sırasında tek kullanımlık eldivenler ve maskeler takılmalıdır.
4. Reaktif, kullanım sırasında RNase ile kontamine olur.
Öneri: İlgili deneyler için yeni bir dizi bitki toplam RNA ekstraksiyon kitleri ile değiştirin.
5.RNA manipülasyonu için kullanılan santrifüj tüpleri ve pipet uçları RNaz ile kirlenmiştir.
Öneri: RNA ekstraksiyonunda kullanılan santrifüj tüplerinin, pipet uçlarının, pipetlerin vb.
Kullanım kılavuzları:
