Giriiş:

Bilimsel adı ribonükleik asit olan RNA, kısaltması RiboNucleic Acid'den gelir, en az onlarca ribonükleotidin fosfodiester bağları yoluyla bağlanmasıyla oluşan bir nükleik asit türüdür.

RNA'yı keşfetmenin öncülü, kirlilik içermeyen Toplam RNA'yı çıkarmaktır ve RNA ekstraksiyonunun temel prensibi kabaca şu şekilde özetlenebilir:

1. Önce hücreleri bozun

2. Ardından makromoleküler safsızlıkları (proteinler, lipitler, DNA vb.)

3. Son olarak, tuzlar ve organik çözücüler uzaklaştırılırken ve RNA daha da saflaştırılırken RNA çökeltilir.

Ekstraksiyon yönteminin dünü ve bugünü

İlk nesil RNA ekstraksiyon yöntemi, Piotr Chomczynski adlı büyükbaba ve büyükanne Nicoletta Sacchi tarafından icat edilen TRIzol çökeltme yöntemidir (kullanılan reaktifler arasında guanidin izotiyosiyanat, fenol, kloroform vb. bulunur), çünkü bu buluş hızlı ve kolay bir şekilde RNA ekstraksiyonuna olanak tanır, o zamandan beri RNA araştırmalarında artış başlamıştır.

Daha sonra büyükbabam bu patenti Invitrogen'e sattı ve Invitrogen bu yöntemi dünyaya tanıtarak yaygın olarak kullanılan bir yöntem haline geldi.

Daha sonra Invitrogen, Thermo tarafından satın alındı!

Temsili ürün: Invitrogen'in TRIzol reaktifi

Bununla birlikte, TRIzol çöktürme yöntemi, birden çok çökeltme ve RNA ekstraksiyonu gerektirir ve kullanılan reaktifler toksiktir ve çalışması uzun zaman alır.

Bu nedenle, diğer safsızlıkları uzaklaştırırken numunedeki RNA'nın geri kazanımını en üst düzeye çıkarmak için spesifik bir nükleik asit adsorpsiyon malzemesi olarak silika jel membranı kullanan ikinci nesil kolon enzimi saflaştırma yöntemi ortaya çıktı.

İkinci nesil yöntem, istikrarlı performans temelinde işlemi basitleştirir, risk faktörünü azaltır ve RNA ekstraksiyonunun verimliliğini artırır.

Temsili ürünler: QIAGEN RNeasy ve çoğu yerli ürün

Bununla birlikte, hem birinci hem de ikinci nesil yöntemler, sonraki aşağı akış deneylerine bazı rahatsızlıklar getiren DNA kontaminasyonunu gidermek için DNase kullanımını gerektirir.Kalıntı DNaz, ters transkripsiyonun etkinliğini azaltacak ve birinci sarmal cDNA sentezini azaltacak, böylece sonuçların doğruluğunu etkileyecektir.

Bu nedenle, üçüncü nesil ekstraksiyon yöntemi, ikinci nesil bazında optimize edilmiştir.Deneyin herhangi bir enzim eklemesine gerek yoktur ve yalnızca iki sütun ile RNA kolayca elde edilebilir.

Sütun 1: DNA'yı temizlemek için DNA Temizleme Sütunu

Sütun 2: Yalnızca RNA Sütunu, RNA'yı spesifik olarak adsorbe eder ve kurtarır

Bu kadar basit bir işlem sadece zamandan tasarruf sağlamakla kalmaz, aynı zamanda sonraki deneylerin çalışmasını da kolaylaştırır!

Temsili ürünler: QIAGEN RNeasy Plus veforegeneRNA saflaştırma serisi ürünler

（RNeasy Artı）

（Foregene'sBitki Toplam RNA İzolasyon Kiti）

Sessizce söyle!Foregene'nin RNA kiti ayrıca, insan vücuduna herhangi bir toksik madde eklemeden katı yüzeydeki 400μg RNase'i 1 dakikada tamamen kaldırabilen, kullanımı süper kolay bir RNase Eraser sunar!

resim1: Operasyonel süreç karşılaştırma tablosu

Foregene'nin ürünleri, RNA ekstraksiyonunu sadece iki şarkıda tamamlayabilir, başkalarını deney ilerlemenizi kıskandırmayın!

resim2:Edeneysel sonuçlar karşılaştırma Tablosu

Birinci nesil (1: TRIzol)

İkinci nesil (2: QIAGEN'den RNeasy)

Üçüncü nesil (3: QIAGEN'den RNeasy plus, 4: Foregene)

resim3: qPCR grafiği (amplifikasyon eğrisi grafiği)

Birinci nesil (yeşil, TRIzol - anlamına gelir, kırmızı, TRIzol + anlamına gelir)

İkinci nesil (gök mavisi, QIAGEN RNeasy- anlamına gelir, kırmızı, QIAGEN RNeasy + anlamına gelir)

Üçüncü nesil (mavi, QIAGEN RNeasy plus anlamına gelir, yeşil, Foregene anlamına gelir)

(Not: qPCR grafiği “-”, DNaz eklenmemiş ve DNA kontaminasyonu kaldırılmamış demektir. Bu nedenle CT daha yüksektir ve sonuç doğru değildir; “+”, DNaz eklenmiş ve DNA kontaminasyonu kaldırılmış, sonuç doğrudur)

Her teknik yükseltme, deneyin işleyişinin daha basit ve daha kullanıcı dostu bir yönde geliştiği anlamına gelir.

Foregene, daha fazla bilimsel araştırmacının deneysel zamandan ve maliyetten tasarruf etmesine, yüksek kaliteli deneysel sonuçlar elde etmesine ve birlikte daha değerli bilimsel araştırma başarıları yaratmasına yardımcı olmayı amaçlamaktadır.