ne kadar biliyorsun

Hakkındanükleik asit ekstraksiyonu

Saflaştırılmış nükleik asidin başlangıcı ve sonu

Her şey başlangıçta zordur, saflaştırılmış nükleik asit en iyisidir

Sonraki deneyler için moleküler deneylerin başlatılması

Başarı veya başarısızlığın çok önemli bir etkisi vardır.

Eser/ultra iz UV spektrofotometre, nükleik asit konsantrasyonunu ve protein ve tuz iyonu kalıntılarını basit, hızlı ve ekonomik bir şekilde tespit edebildiği için birçok bilimsel araştırmacı tarafından tercih edilmektedir.

Hepimizin bildiği gibi A260 nükleik asit absorbans OD değeri, A280 protein konsantrasyonu absorbans OD değeri, A230 tuz iyonu konsantrasyonu absorbans OD değeri anlamına gelir, yani A260 nükleik asit konsantrasyonunu dönüştürebilir, A260/280 protein kalıntısı, A260/230 tuz iyonu kalıntısı anlamına gelir, ancak bu sadece araştırmacılar tarafından çok sayıda ölçüm sonucuna dayanarak keşfedilen bir kuraldır ve "gelenekselDNA ve RNA'nın saflığını açıklayabileceğine inanmakBelli ölçüde.Nükleik asit verimi ve saflığının tanımlanması için tek standart değildir, sadece referans olarak kullanılır ve “altın standart” değildir.

Thermo Fisher ND-2000 kılavuzu, test sonuçlarının güvenilirliğini vurgular

Bunun nedeni, bir mikro/ultramikro UV spektrofotometre kullanılarak elde edilen sonuçların yalnızca yandan nükleik asidin verimini ve saflığını yansıtması ve birçok etkileyen faktörün (optik yol, numune hacmi, numune konsantrasyonu, pH değeri, absorbans ölçümünü etkileyen diğer iyonlar, vb.) olması ve ölçülen OD değerinin mutlaka doğru olmamasıdır.Aynı zamanda, absorbans değeri belirleme materyalinin özgül olmaması nedeniyle, tek sarmallı DNA, çift sarmallı DNA, RNA, dNTP'ler ve bazı proteinlerin tümü 260nm dalga boyunda absorpsiyon tepe noktalarına sahiptir ve tek başına A260 tarafından belirlenen konsantrasyon mutlaka gerçek DNA veya RNA değildir.Konsantrasyon, bütünlüğü ve bozulması yargılanamaz.

Peki saflaştırılmış nükleik asidimizin kalitesini nasıl değerlendirebiliriz?Tespit için bir mikro/ultramikro UV spektrofotometre kullanmaya ek olarak, nükleik asidin saflığını ve bütünlüğünü görsel olarak göstermek ve konsantrasyonu bir dereceye kadar belirtmek için agaroz jel elektroforezi gibi yöntemler de gereklidir.Bu şekilde, çeşitli yöntemlerin tespit sonuçlarından elde edilen nükleik asit verimi ve saflığı güvenilirdir.

Deneysel grafik karşılaştırması

H1299 hücrelerinin genomik DNA'sı, A şirketinin DNA Ekstraksiyon kitleri kullanılarak ekstre edildi ve yüksek OD değerleri ile sonuçlanan önemli safsızlık kontaminasyonu görüldü.

(OD ölçüm değeri ve karşılık gelen elektroferogram)

değerlendirme indeksi

Nükleik asit verimi ve kalite testi için bir "altın standart" var mı?

Bildiğimiz kadarıyla basit, hızlı ve ucuz bir yöntem yok.Spektrofotometre, jel elektroforezi veya kütle spektrometrisi olsun, hepsi farklı yönlerden çözeltideki nükleik asidin konsantrasyonunu ve saflığını yansıtır ve birbirlerine atıfta bulunarak değerlendirilmeleri gerekir.

En iyi değerlendirme endeksi her zamantakip eden deneysel uygulama.Ters transkripsiyon ve PCR amplifikasyonunun etkinliğini etkilemez.Güvenilir amplifikasyon ürünleri ve Ct değerleri elde etmek ve dizileme yoluyla tam bir dizi elde etmek, başarılı nükleik asit ekstraksiyonudur.

Özetlemek gerekirse, salt oran teorisi görüşüne, “iyi aşağı yönlü deneysel sonuçların iyi ekstraksiyon parametreleri olarak kullanılması” görüşüyle ​​meydan okunmalıdır!

Yüksek DNA/RNA saflığı elde etmek için önerilen Foregene DNA RNA ekstraksiyon kitleri:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/