Yazarlar: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Birim: Jiaozhou Hastanesi, Tongji Üniversitesi'ne Bağlı Dongfang Hastanesi

Şu anda, solunum patojeni nükleik asit tespiti için ana numune tipi boğaz sürüntüsüdür.Taşıma ve depolama için hepsinin soğutulması veya dondurulması gereken, yaygın olarak kullanılan birçok türde numune koruma solüsyonu vardır;Toplama ve taşıma işlemi sırasında tüm düşük sıcaklık sürecini kontrol etmek zordur ve numune testinden önce kalite kontrolünü sağlamak zordur.^[1-2].

RNaz (RNaz), esas olarak nükleotidler arasındaki fosfodiester bağlarını kopararak RNA'yı hidrolize eden bir endonükleazdır.RNaz molekülü çok kararlıdır, yapısında disülfit bağları vardır ve aktivitesi iki değerlikli katyonların varlığını gerektirmez, bu nedenle RNaz kolayca denatüre olmaz ve yüksek sıcaklıktan veya denatüranların kullanımından sonra bile renatürasyonu kolaydır.RNazlar endojen ve eksojen olarak ikiye ayrılır.Endojen RNazlar, hücreler parçalandığında aynı anda salınabilir.Bu nedenle, endojen RNazların rolünü ortadan kaldırmak, RNA ekstraksiyon sürecinde çok kritik bir adımdır.Eksojen RNazlar yaygın olarak dağıtılır.RNazlar havada, insan derisinde, saçta ve tükürükte bulunur ve bunlar RNA'nın kolayca parçalanmasının önemli nedenleridir.^[3].

veri sorgusu

CANS-CL02-A009 “Moleküler Tanı Alanında Tıbbi Laboratuvar Kalitesi ve Yetkinlik Akreditasyon Kılavuzlarının Uygulanması” teknik gerekliliklerde, uygulamaya göre uygun su kalitesi standartlarının formüle edilmesi gerektiğini önermektedir;Tek kullanımlık hava geçirmez kaplar:

RNaz/Sınıflandırma

(1) RNaz A

Sığır pankreasından türetilen ribonükleaz A (RNaz A), bitişik nükleotitlerin oluşturduğu sitozin veya urasili keserek RNA üzerindeki pirimidin kalıntılarının 3' ucuna spesifik olarak saldırabilen bir endoribonükleazdır.Fosfodiester bağı, reaksiyonun nihai ürünü, 3' pirimidin nükleotidi ve sonunda 3' pirimidin nükleotidi olan bir oligonükleotiddir.

(2) RNaz T1

Ribonükleaz T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae'den türetilir, spesifik olarak guanin 3'-terminal fosfatı üzerinde etki gösterir ve bölünme bölgesi guanin 3' fosfatı ile komşu nükleotidlerin 5' hidroksili arasındadır.Reaksiyonun nihai ürünü, sonunda 3'guanilik asit bulunan 3'guanilik asit ve oligonükleotid fragmanlarıdır.

(3) RNaz H

Ribonükleaz H (RNaz H) ilk olarak buzağı timus dokusundan keşfedildi ve kodlayıcı geni Escherichia coli'ye klonlandı.Spesifik olarak DNA'yı bozabilir: RNA hibrid duplekslerindeki RNA şeritlerini, 3'-OH ve 5'-monofosfat uçlu oligonükleotidler ve mononükleotidlerle sonuçlanır, tek veya çift sarmallı DNA veya RNA'yı bozamaz.

RNaz

İşlev ve kullanım

Ribonükleaz, ribonükleik asidin (RNA) bozunmasını katalize edebilir ve yapay olarak sentezlenebilir.Tıbbi merhem, travma ve eklem ağrısını tedavi etmek için topikal olarak kullanılır.Raporlara göre ribonükleaz, konakçı hücre metabolizmasını değiştirebilir, virüs sentezini inhibe edebilir, in vitro influenza virüsünün çoğalmasını inhibe edebilir ve tavuk embriyolarında vaccinia ve herpes virüsünün oluşumunu inhibe edebilir.Ribonükleazın günlük 180 mg intramüsküler enjeksiyonunun klinik kullanımı, salgın ensefalit tedavisinde faydalıdır, ribonükleaz ribonükleik asidin (RNA) bozunmasını katalize edebilir ve artık yapay olarak sentezlenebilir.Tıbbi merhem, travma ve eklem ağrısını tedavi etmek için topikal olarak kullanılır.Raporlara göre ribonükleaz, konakçı hücre metabolizmasını değiştirebilir, virüs sentezini inhibe edebilir, in vitro influenza virüsünün çoğalmasını inhibe edebilir ve tavuk embriyolarında vaccinia ve herpes virüsünün oluşumunu inhibe edebilir.Günlük 180 mg ribonükleaz intramüsküler enjeksiyonunun klinik kullanımı epidemik ensefalit tedavisinde faydalıdır.

RNaz

İnhibitör Tanımı

RNase inhibitör biriminin tanımı: 5ng RNase A'nın aktivitesinin %50'sini inhibe etmek için gereken enzim miktarı bir birimdir.

RNaz İnhibitörleri Nasıl Çalışır?

Guanidin izotiyosiyanat:

Guanidin izotiyosiyanat, moleküler formülü C2H6N4S olan organik bir bileşiktir.Esas olarak biyolojik tıpta, kimyasal reaktiflerde vb.Dokuyu parçalayabilir, hücre yapısını yok edebilir ve nükleik asidi nükleoproteinden ayırabilir ve RNaz'a güçlü bir denatürasyona sahiptir.Şu anda en etkili RNaz inhibitörüdür.

TRIzol, toplam RNA'yı hücrelerden veya dokulardan doğrudan çıkarabilen yeni bir toplam RNA ekstraksiyon reaktifidir.Hücreleri hızla parçalayabilen ve hücreler tarafından salınan nükleazları inhibe edebilen fenol ve guanidin izotiyosiyanat gibi maddeler içerir.

(Bununla birlikte, guanidin izotiyosiyanat laboratuvar araştırmacılarının sağlığı için tehlikelidir.)

Nasin:

Sıçan karaciğerinden veya insan blastoderminden ekstrakte edilen asit glikoprotein.Rnasin, onları etkisiz hale getirmek için çeşitli RNazlara bağlanabilen, rekabetçi olmayan bir RNaz inhibitörüdür.

(Daha fazla ayrıntı: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hyüksek sıcaklık:

Yüksek sıcaklık aynı zamanda protein denatürasyonunun yaygın bir yoludur.

Dietilpirokarbonat (DEPC):

DEPC, proteinleri denatüre etmek için RNaz aktif grubunun amino asit imidazol halkası ile birleşerek RNaz aktivitesini inhibe edebilen güçlü fakat eksik bir RNaz inhibitörüdür.

Vanadil ribonükleosit kompleksi:

RNaz'a geçiş maddeleri formunda bağlanan ve RNaz'ın aktivitesini neredeyse tamamen engelleyebilen vanadyum oksit iyonları ve nükleositlerden oluşan bir kompleks

diğer:

SDS, üre, iki atomlu toprak vb. de RNaz üzerinde belirli bir inhibitör etkiye sahiptir.

Uzman Yorumları

Li Yujie Baş Teknisyen

Laboratuvar Departmanı Direktörü, Jiaozhou Hastanesi, Tongji Üniversitesi'ne Bağlı Dongfang Hastanesi

Eksojen RNaz'ın biyolojik bozunmasını önlemek için, RNA ekstraksiyon işlemi sırasında maskeler, eldivenler ve şapkalar giyilmeli ve sık sık değiştirilmelidir.Tüm cam eşyalar 200°C'de kurutma fırınında 2 saatten fazla pişirilmelidir.Plastik gibi pişirme için kullanılan malzemelerin DEPC suyuyla işlenmesi ve ardından damıtılmış suyla yıkanması gerekir.RNA'nın ekstraksiyonu, korunması ve tanımlanması için kullanılan reaktifler veya cihazlar RNA'ya tahsis edilmeli ve bağımsız bir RNA operasyon alanı kurulmalıdır.

Referanslar:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Avustralya Yerli çocuklarında akut alt solunum yolu enfeksiyonlarının başlamasından hemen önce nazofarenksteki bakteri ve virüsler[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Çin Önleyici Tıp Derneği Hastane Enfeksiyon Kontrol Şubesi.Klinik mikrobiyal örneklerin toplanması ve incelenmesi için yönergeler [J].Çin Hastane Enfeksiyonu Dergisi, 2018(20):3192-3200.

[3] “Klinik Test On Bin Neden Moleküler Biyoloji Test Hacmi”