Deney personelinin davranışını standart hale getirmek için PCR deney SOP'si oluşturun.
Deneyi yapan kişi, çalışma prosedürlerine sıkı sıkıya uyar ve insan faktörlerinden kaynaklanabilecek PCR kirliliğini en aza indirir veya kirliliğin oluşmasını engeller.Ek olarak, deneyi yapan kişi, ilgili ekipmanı kullanma, tüm çalışma sürecini netleştirme, kontaminasyon arıtma yöntemleri ve laboratuvar kalite kontrol yöntemlerinde uzmanlaşma ve test sonuçlarını doğru şekilde yorumlayabilme dahil olmak üzere ilgili mesleki bilgi ve becerilere sahip olmalıdır.
Standart bir PCR laboratuvarı kurun.
PCR laboratuvarı prensip olarak reaktif hazırlama alanı, numune işleme alanı, amplifikasyon alanı ve amplifikasyon ürünü analiz alanı olmak üzere dört alana ayrılmıştır.İlk iki alan amplifikasyon öncesi alanlardır ve son iki alan amplifikasyon sonrası alanlardır.Ön amplifikasyon bölgesi ve amplifikasyon sonrası bölge kesinlikle ayrılmalıdır.Deney malzemeleri, reaktifler, kayıt kağıdı, kalemler, temizlik malzemeleri vb. yalnızca ön amplifikasyon alanından amplifikasyon sonrası alana, yani reaktif hazırlama alanından → numune işleme alanından → amplifikasyon alanından → amplifikasyon ürünü analiz alanından akabilir ve geriye doğru akmamalıdır.Laboratuvardaki hava akımı da ön amplifikasyon alanından amplifikasyon sonrası alana doğru akmalı ve geriye doğru akmamalıdır.İdeal PCR laboratuvar tasarımı aşağıda gösterilmiştir:
Şekil A: Tampon odasında negatif basınç ile ideal PCR laboratuvar kurulum modu
Şekil B: Tampon odasında pozitif basınçlı ideal PCR laboratuvar kurulum modu
Şekil A ve Şekil B'de verilen PCR laboratuvar kurulum şemaları daha ideal bir kurulum modu olmalıdır ve koşulları olan laboratuvar, tasarım için bu moda başvurabilir.Sıradan laboratuvarlar için PCR amplifikasyon alanı ile ürün analiz alanının birbirinden ayrılabilmesi ve numune hazırlama alanı ile PCR amplifikasyon alanında kapak açıklığının mümkün olduğunca azaltılması önerilir.Unutmayın: Ürün analiz alanındaki ürünlerin ve deney malzemelerinin numune hazırlama alanına ve PCR amplifikasyon alanına götürülmesi kesinlikle yasaktır.
Laboratuvar yalnızca PCR tespiti ve tanımlaması yapıyorsa, geleneksel PCR yerine floresan kantitatif PCR kullanılması önerilir.
Floresan kantitatif PCR saptama sonuçları, floresan sinyalleri ile toplanabilir ve analiz edilebilir, bu nedenle reaksiyondan sonra elektroforez için kapağı açmaya gerek yoktur, bu da reaksiyon ürünlerinin aerosol oluşturmak üzere sızmasının neden olduğu PCR ürünü kontaminasyonunu önler.Jel elektroforezinin yükleme adımı sırasında kapak açma sayısını artırırsanız, aerosol kontaminasyonu meydana gelebilir.Kantitatif PCR uygulamasının teşvik edilmesi ve kademeli olarak kalitatif PCR'nin yerini alması önerilir.
PCR reaksiyonu için UNG anti-PCR ürünü kontaminasyon sistemi kullanılmaktadır.
Sistem dTTP yerine dUTP kullanır.PCR reaksiyonundan sonra, tüm PCR ürünleri (DNA fragmanları) dUTP ile birleştirilir;PCR reaksiyonunun bir sonraki turunda sisteme eklenen UNG enzimi, spesifik olarak dUTP içeren tüm DNA fragmanlarını parçalayabilen PCR öncesi 37°C'de 5 dakika inkübe edilir ve ardından PCR reaksiyonunu gerçekleştirir.Bu, PCR ürünlerinin neden olduğu aerosol kontaminasyonunu tamamen ortadan kaldırabilir.Etki aşağıdaki şekilde gösterilmiştir:
Not: Direkt PCR serisi için Foregene anti-PCR ürün kontaminasyon sisteminin seri ürünlerini seçebilirsiniz.Tavsiye etmek
Büyük ölçekli genotip testi yapan laboratuvarlar için, makul laboratuvarların oluşturulmasına ek olarak reaktifleri test etmek için UNG anti-PCR ürün kontaminasyon sisteminin kullanılması şiddetle tavsiye edilir.
Hatırlatma: Bu sistemin kullanılması, halihazırda neden olmuş olan PCR ürünü kontaminasyonunu ortadan kaldıramaz.Bu nedenle PCR ürünlerinin Yanlış pozitif kontaminasyonunu önlemek için ilgili testin başında UNG sistemi kullanılmalı ve PCR amplifikasyonu için UNG sistemi kullanılmalıdır.
Aşağıdakiler gibi büyük ölçekli testler yapılırken Foregene'in Direct PCR-UNG sisteminin kullanılması önerilir:
Bitki Yaprağı Direkt PCR Kiti-UNG；
Bitki Tohumu Direkt PCR Kiti-UNG；
Hayvan Dokusu Direkt PCR Kiti-UNG；
Fare Kuyruğu Doğrudan PCR Kiti-UNG;
Zebra Balığı Direkt PCR Kiti-UNG。
Foregene'den bu kit serisiyalnızca hızlı ve büyük ölçekte PCR tespitini gerçekleştirmekle kalmaz, aynı zamanda PCR ürünü kontaminasyonunu etkili bir şekilde önleyebilir ve kontrol edebilir.
Gönderim zamanı: 19 Mart 2021
