Hot-start Taq enzimi yaygın olarak kullanılmaktadır.Sıradan DNA polimeraz ile karşılaştırıldığında, sıcak başlangıçlı Taq enzimi, bazı spesifik olmayan amplifikasyonları ve primer dimerlerin oluşumunu etkili bir şekilde önleyebilir ve hedef gen amplifikasyonunun başarı oranını etkili bir şekilde artırabilir.Özellikle genetik test alanında, hot-start Taq enzimi endüstride zorunlu bir standart olarak belirlenmiştir ve sıradan DNA polimeraz kullanılmamalıdır.Yukarıdan da görülebileceği gibi, sıcak başlangıçlı Taq enzimleri yaygın olarak kullanılmaktadır.Şu anda iç pazarda birçok marka sıcak başlangıçlı Taq enzimi var, ancak yüksek kalitede çok sayıda sıcak başlangıçlı Taq enzimi yok.Bu kadar çok sıcak başlangıçlı Taq enzim ürünü ile karşı karşıya kaldığımızda, nasıl seçim yapmalıyız?

1. Yüksek amplifikasyon verimliliğine sahip hot-start Taq enzimini seçin

PCR amplifikasyon etkinliği, Taq enziminin performansı ile yakından ilişkilidir.İyi bir Taq enzim reaksiyon sistemi optimize edildikten sonra amplifikasyon verimliliği %95'in üzerindedir ve başlangıç ​​şablon miktarının amplifikasyon aralığı geniştir.Hedef gen içeriği düşük olduğunda tatmin edici amplifikasyon elde edilebilir ve şablon miktarı yüksek olduğunda zehirlenmek kolay değildir ve üstel amplifikasyon süresi uzundur.Zayıf performansa sahip Taq enzimi için, reaksiyon sistemi birçok kez optimize edilmiş olsa bile, amplifikasyon verimliliği hala %90'dan azdır, amplifikasyon eğrisinin "S" şekli belirgin değildir, eğim küçüktür ve eğri düzdür.Şablon miktarı düşük olduğunda amplifiye edilemez ve şablon miktarı yüksek olduğunda amplifikasyon etkisi ideal değildir.Bu nedenle, yüksek amplifikasyon verimliliğine sahip DNA polimerazların seçimi, PCR ve qPCR'nin başarısı için çok önemlidir.

2. Güçlü enzim gücüne sahip sıcak başlangıçlı Taq enzimini seçin

Taq enziminin enzimatik gücü, amplifikasyon verimliliği ile ilgilidir.Genel olarak, sıcak başlatmalı Taq enziminin enzimatik gücü ne kadar güçlüyse, PCR amplifikasyonunun üstel büyüme süresi o kadar uzun, 'S-şekilli' eğri o kadar tipik, floresans sinyal değeri o kadar yüksek ve multipleks PCR tespiti için o kadar uygun.Zayıf enzimatik güce sahip marka DNA polimerazları genellikle sadece 2-pleks reaksiyonlarını destekleyebilir.3-pleks reaksiyonları yaparken, amplifikasyon eğrisi düşüktür, floresans sinyal değeri düşüktür ve tipik bir amplifikasyon eğrisi yoktur, dolayısıyla sonuçları yargılamak zordur.

3. Yüksek duyarlılığa sahip sıcak başlangıçlı bir Taq enzimi seçin

Genel olarak konuşursak, DNA polimeraz yüksek amplifikasyon verimliliğine ve yüksek hassasiyete sahiptir, ancak tutarsızlıklar da vardır.Amplifiye edilecek örneğin hedef gen bolluğu düşükse, Taq enziminin amplifikasyon duyarlılığının test edilmesi önerilir.En yaygın tespit yöntemi, hedef gen plazmid fragmanının 10-kat veya 5-kat gradyan seyreltmesini gerçekleştirmek, daha düşük dilüsyonda PCR tespitini gerçekleştirmek ve daha yüksek tespit hassasiyetine sahip sıcak başlangıçlı Taq enzimini seçmektir.

Araştırmacıların kendi deneysel gereksinimlerine ve finansman koşullarına göre seçim yapmaları gerektiği yukarıdan görülebilir.Hot-start Taq enziminin amplifikasyon verimliliğini ve hassasiyetini tespit etmek için bir gradyan dilüsyon amplifikasyon deneyi yapmak en iyisidir.

Bir Foregene örneği'Taq DNA Polimeraz:

Foreasy HS Taq DNA Polimeraz

Tanım

Foreasy HS Taq DNA Polimeraz, Escherichia coli mühendislik bakterilerinde gen rekombinasyon teknolojisi ile ifade edilen bir DNA polimerazdır.Enzim, ürünü son derece dayanıklı ve uyumlu hale getiren ve tespit reaksiyonları için bir şablon olarak numune lizatını (Foregene Lysis sistemi) doğrudan kullanabilen benzersiz bir reaksiyon tamponu ile birleştirilir.

Başvuru

Saflaştırılmış şablonların ve saflaştırılmamış şablonların kalitatif PCR ve kantitatif PCR tespiti.

Kalite kontrol

1.Ekzojen nükleaz aktivitesi tespit edilmedi

2. Host olmadan kalan genomik DNA'yı tespit etmek için PCR yöntemi

3. İnsan Genomundaki tek kopya genleri etkili bir şekilde çoğaltabilir

4. Bir hafta boyunca oda sıcaklığında saklayın, bariz aktivite değişiklikleri yok

Ürün detayları: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/