Tutkal Geri Kazanımını İyileştirme İpuçları

1. Elektroforez sırasında numune yükünü artırın.

2. Yeni hazırlanmış elektroforez tamponu kullanın.

3. Yapıştırıcıyı keserken, yapıştırıcı kesme hacmini azaltmak için sadece yapıştırıcıyı şeritlerle kesmeye çalışın: birkaç amaç parçası olan yapıştırıcıya ihtiyacınız yoktur, aksi takdirde geri kazanım oranını etkiler.

4. İki veya daha fazla yapıştırıcıyı erittikten sonra hacmi ne kadar büyük olursa olsun bir tüp kullanarak aynı kolona aktarın.

5. Çözeltiye eklenen solüsyon biraz daha fazla olabilir ki bu DNA'nın zara bağlanmasına daha elverişlidir ancak genellikle 750ul'u geçmez.

6. Jel geri kazanımının anahtarı, kolondaki çözeltinin tuz konsantrasyonu, asitliği (yükü) ve hidrofobikliği aracılığıyla kolona DNA'yı bağlamaktır.Bu nedenle, elektroforez tamponunun pH'ı çok yüksekse, sol'a 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) eklenebilir;DNA moleküllerini zar üzerinde daha iyi yakalamak için, yapıştırıcıyı erittikten sonra sıvıya ısıtmak için %30 izopropanol eklenebilir.

7. Elüenti eklemeden önce, etanolün tamamen buharlaşması için kolonu birkaç dakika (yaklaşık 10 dakika) oda sıcaklığında bırakın.

8. Son olarak, geri kazanım hacmini en aza indirmek için daha az eluent ekleyin.Genel olarak, elüsyon için 30-50μl eluent kullanılır (çok az değil, aksi takdirde elüsyona elverişli olmayan membranı ıslatamaz);elüsyon damlacıkları, zara bağlı DNA'yı tamamen elüe etmek için zarın merkezindedir.

9. Elüenti ekledikten sonra, 55 derecelik bir su banyosunda 5 dakika elüte edilebilir veya 50 derecelik bir su banyosuna 10 dakikadan fazla yerleştirilebilir veya gece boyunca 4 derecede bir parafilm ile kapatılabilir ve ardından ertesi gün iyileşme için santrifüjlenebilir, etki iyidir.

10.Santrifüjlenmiş eluatı tekrar adsorpsiyon kolonuna ekleyin ve tekrar santrifüjleyin.

PCR ürünü geri kazanımı için ayrıntılı yöntemler ve prosedürler

1. Sıradan kauçuk geri dönüşümü

Yapıştırıcıyı geri kazanmak istiyorsanız, uygun ve biraz daha yüksek geri kazanım oranına sahip bir kit kullanmak en iyisidir.Gerçekten manuel olarak kurtarmanız gerekiyorsa, yapıştırıcıyı kestikten sonra TE hacminin 3 katı kadar ekleyebilirsiniz.Su banyosunda eritildikten sonra fenol, fenol/kloroform temiz bir şekilde ekstrakte edilir ve etanol çöktürülür.Bu kadar.

2. Düşük erime noktalı jellerden DNA geri kazanımı

DNA Fragmanlarının Saflaştırılması Jelin hacmi kadar TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ekleyin ve jeli tamamen çözmek için 5 dakika 65°C'lik su banyosuna yerleştirin.

Oda sıcaklığına getirildikten sonra eşit miktarda fenol (TE ile doyurulmuş, TE üst tabakaya kapatılmış ve fenolün alt tabakası çıkarılmıştır) ilave edilerek hafifçe karıştırılmıştır (karıştırmaya gerek yoktur) ve 12.000 rpm'de 3 dakika santrifüjlenmiştir.1-2 kez tekrarlayın.

Süpernatantı alın, etanol çökeltmesini gerçekleştirmek için 0,1 hacim 3mol/L sodyum asetat (pH 5,2) ve 2,5 kat mutlak etanol ekleyin.Saflaştırılmış DNA'yı uygun miktarda TE ile çözün, içeriği ölçün ve kullanıma hazırlayın (hedef gen yapısı analizi, prob hazırlama vb. için kullanılabilir).

3. İyi amplifikasyon özgüllüğü ile PCR geri kazanımı

PCR amplifikasyonunun özgüllüğü iyi ise, bu sadece PCR ürününün basit bir saflaştırılması ve geri kazanılmasıdır.PCR ürününe 50ug/ml proteinaz K ekleyebilir, 37 derecede 1 saat süreyle, bir kez fenol/kloroform ile ekstrakte edin, bir kez kloroform ile ekstrakte edin ve 0,1 hacim süpernatan ekleyin.Sodyum asetat, 2.5 hacim mutlak etanol ile çökeltme yoluyla geri kazanılmıştır.

İlgili ürünler:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/