Hayvan Toplam RNA İzolasyon Kiti Hayvan Dokuları ve Hücreleri için Toplam RNA Ekstraksiyonu ve Saflaştırma Kitleri
Takım Açıklaması:
Çeşitli hayvan dokularından yüksek saflıkta ve yüksek kaliteli toplam RNA'yı hızlı ve verimli bir şekilde çıkarın.
RNA bozulması hakkında endişelenmenize gerek yok.Tüm sistem RNaz İçermez
DNA-Cleaning Column kullanarak DNA'yı etkili bir şekilde çıkarın
DNaz eklemeden DNA'yı çıkarın
Basit—tüm işlemler oda sıcaklığında tamamlanır
Hızlı—işlem 30 dakikada tamamlanabilir
Güvenli—organik reaktif kullanılmaz
Yüksek saflık—OD260/280≈1.8-2.1
Kit Açıklamaları
50 Hazırlık, 200 Hazırlık
Bu kit kullanırdöndürme sütunu ve formülüçeşitli hayvan dokularından yüksek saflıkta ve yüksek kaliteli toplam RNA'yı yüksek verimlilikle çıkarabilen şirketimiz tarafından geliştirilmiştir. Genomik DNA'yı süpernatandan ve doku lizatından kolayca ayırabilen ve adsorbe edebilen, basit ve zaman kazandıran verimli bir DNA Temizleme Kolonu sağlar;Yalnızca RNA Sütunu, RNA'yı verimli bir şekilde bağlayabilir ve benzersiz bir formülle eş zamanlı olarak işlenebilir Çok sayıda örnek.
Tüm sistem RNaz İçermez, böylece ekstrakte edilen RNA bozulmaz;Tampon RW1, Tampon RW2 tampon yıkama sistemi, böylece elde edilen RNA protein, DNA, iyon ve organik bileşik kirliliği içermez.
Kit bileşenleri
| Hayvan Total RNA İzolasyon Kiti | ||
| Kit bileşenleri | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ton | 200 ton | |
| Tampon RL1* | 25ml | 100ml |
| Tampon RL2 | 15ml | 60ml |
| Tampon RW1* | 25ml | 100ml |
| Tampon RW2 | 24ml | 96ml |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 10ml | 40ml |
| Yalnızca RNA Sütunu | 50 | 200 |
| DNA Temizleme Kolonu | 50 | 200 |
| Kullanım klavuzu | 1 parça | 1 parça |
Ürün Bilgisi
| Biçim | Döndürme sütunu | arıtma bileşeni | Foregene kolonu, reaktif |
| akı | 1-24 örnek | Hazırlık süresi | ~30 dakika (24 örnek) |
| Santrifüj | Masa santrifüjü | Piroliz ayırma | santrifüj ayırma |
| Örnek | Hayvan dokusu;hücre | numune miktarı | Doku:10-20 mg;Hücre:(1-5)×106 |
| elüsyon hacmi | 50-200 uL | Maksimum yükleme hacmi | 850 uL |
Özellikler ve avantajlar
■ RNA bozulması hakkında endişelenmenize gerek yok;tüm sistem RNaz İçermez
■ DNA-Temizleme Sütununu Kullanarak DNA'yı Etkili Bir Şekilde Çıkarın
■ DNaz eklemeden DNA'yı çıkarın
■ Basit-tüm işlemler oda sıcaklığında tamamlanır
■ Hızlı işlem 30 dakikada tamamlanabilir
■ Güvenli-organik reaktif gerekmez
■ Yüksek saflık -OD260/280≈1.8-2.1
Kit uygulaması
Çeşitli taze veya dondurulmuş hayvan dokularından veya kültürlenmiş hücrelerden toplam RNA'nın ekstraksiyonu ve saflaştırılması için uygundur.
Ürün parametreleri
■ Aşağı akış uygulamaları: birinci iplikçik cDNA sentezi, RT-PCR, moleküler klonlama, Northern Blot, vb.
■ Örnekler: hayvan dokuları, kültürlenmiş hücreler
■ Dozaj: Dokular 10-20mg, Hücreler(2-5)×106
■ Saflaştırma sütununun maksimum DNA bağlama kapasitesi: 80 μg
■ Elüsyon hacmi: 50-200 μl
Diyagram
Hayvan Toplam RNA İzolasyon Kiti 20 mg tedavi edildi
Taze fare örnekleri, %5 saflaştırılmış toplam RNA %1 agar alın
Glikojel elektroforezi
1: Dalak 2: Böbrek
3: Karaciğer 4: Kalp
Depolama ve raf ömrü
Kit, oda sıcaklığında (15–25 ℃) veya daha uzun süre 2–8 ℃'de 24 ay saklanabilir.Tampon RL1, β-merkaptoetanol (isteğe bağlı) eklendikten sonra 4 ℃'de 1 ay saklanabilir.
Alıntılanan makaleler
1.EĞER:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., ve ark.Merkezi Bileşik Tasarımın Optimizasyonu Yoluyla Karaciğer Tabanı Düzenlemesi için mRNA Yüklü Lipid Benzeri Nanopartiküller.Av.işlevAnne.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.EĞER:18.187:He X, Hong W, Yang J ve ark.Terapötik kök hücre preparasyonundaki hücrelerin spontan apoptozu, fosfatidilserin salımı yoluyla immünomodülatör etkiler gösterir.Sinyal İletim Hedefi Term.2021 Temmuz 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.EĞER:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J ve ark.N7-Metilguanozin tRNA modifikasyonu, onkojenik mRNA translasyonunu arttırır ve intrahepatik kolanjiokarsinom ilerlemesini destekler.Mol Hücresi.2021 29 Temmuz:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.EĞER:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y ve ark.Mettl14 Aracılı m6A Modifikasyonu, Endoplazmik Retikulum Homeostazını Koruyarak Karaciğer Yenilenmesini Kolaylaştırır.Hücre Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
için RNA izolasyon kitleri diğer örnek kaynaklarmevcut:
Hücre, bitki, viral, kan vb.
RNA ekstrakte edilmiyor veya RNA verimleri düşük
Genellikle doku numunesi RNA içeriği, çalışma yöntemi, elüsyon hacmi, vb. gibi geri kazanım verimliliğini etkileyen çeşitli faktörler vardır.
1. Çalışma sırasında buz banyosu veya kriyojenik (4 °C) santrifüjleme yapılmıştır.
Öneri: Tüm süreç boyunca oda sıcaklığında (15-25°C) çalıştırın, düşük sıcaklıklarda buz banyosu ve santrifüj yapmayın.
2. Uygun olmayan numune muhafazası veya aşırı numune saklama süresi.
Öneri: Numuneleri -80 °C'de saklayın veya sıvı nitrojen içinde dondurun ve tekrarlanan donma-çözülme kullanımından kaçının;RNA ekstraksiyonu için taze doku veya kültürlenmiş hücreler kullanmayı deneyin.
3. Yetersiz numune parçalanması.
Öneri: Dokuyu homojenleştirirken, dokunun yeterince homojen olduğundan ve doku hücrelerinin RNA salınımını açıklamak için yeterince bölündüğünden emin olun.
4. Eluent doğru eklenmemiş.
Öneri: RNaz İçermeyen ddH'nin olduğunu doğrulayın2O, saflaştırma kolonu zarının ortasına damla damla eklenir.
5. Tam etanolün doğru hacmi Tampon RL2 veya Tampon RW2'ye eklenmedi.
Öneri: Talimatları izleyin, Buffer RL2 ve Buffer RW2'ye doğru hacimde mutlak etanol ekleyin ve kiti kullanmadan önce iyice karıştırın.
6. Doku örneği dozu uygun değil.
Öneri: 10-20 mg doku veya (1-5) × 10 kullanın6500 µl tampon RL1 başına hücreler, çünkü aşırı doku kullanımı RNA ekstraksiyonunun azalmasına neden olabilir.
7. Uygun olmayan elüsyon hacmi veya eksik elüsyon.
Öneri: Saflaştırma kolonunun elüsyon hacmi 50-200 µl'dir;elüsyon etkisi tatmin edici değilse, önceden ısıtılmış RNase-Free ddH eklendikten sonra oda sıcaklığı yerleştirme süresinin uzatılması önerilir.2O, örneğin 5-10 dakika.
8. Saflaştırma kolonunda, Tampon RW2 yıkamasından sonra etanol tortusu bulunur.
Öneri: Tampon RW2 yıkamasından sonra etanol kalıntısı varsa, 1 dakika boş tüp santrifüjleme, boş tüp santrifüj işlemi için süre 2 dakikaya çıkarılabilir veya kalıntı etanolü yeterince uzaklaştırmak için saflaştırma kolonu 5 dakika oda sıcaklığında tutulabilir.
Saflaştırılmış RNA bozulur
Saflaştırılmış RNA'nın kalitesi örneğin korunması, RNaz kontaminasyonu ve manipülasyonu gibi faktörlerle ilişkilidir.
1. Doku örnekleri zamanında tutulmuyor.
Öneri: Doku örnekleri veya hücreler toplandıktan sonra zamanında kullanılmazsa, hemen -80 °C'de veya sıvı nitrojende dondurun.RNA'yı çıkarmak için, mümkün olduğunda yeni alınmış bir doku veya hücre örneği kullanın.
2. Doku örneklerinin tekrar tekrar dondurulup çözülmesi.
Öneri: Doku örneklerini saklarken, korumak için bunları küçük parçalara ayırmak ve bunları kullanırken örneğin tekrar tekrar dondurulup çözülmesini ve RNA'nın bozulmasını önlemek için parçalardan birini çıkarmak en iyisidir.
3. Ameliyat sırasında RNase takılır veya tek kullanımlık eldiven, maske vb. giyilmez.
Öneri: RNA ekstraksiyon deneyleri en iyi şekilde ayrı RNA manipülasyon odalarında yapılır ve deneyden önce tablo temizlenir.
RNase girişinin neden olduğu RNA bozulmasını en aza indirmek için deney sırasında tek kullanımlık eldivenler ve maskeler giyin.
4. Reaktifler kullanım sırasında RNase ile kontamine olur.
Öneri: İlgili deneyler için yeni bir Hayvan Total RNA İzolasyon Kiti ile değiştirin.
5. RNA manipülasyonunda kullanılan santrifüj tüpleri, uçları vb. RNaz ile kontamine olmuştur.
Öneri: RNA ekstraksiyonunda kullanılan santrifüj tüplerinin, uçlarının, pipetlerin vb. hiçbirinin RNaz İçermediğini doğrulayın.
Elde edilen saflaştırılmış RNA aşağı akış deneylerini etkiler
Saflaştırma sütunu tarafından saflaştırılan RNA, eğer tuz iyonları, protein içeriği çok büyükse, ters transkripsiyon,Northern Blot ve ark.
1. Elüsyona tabi tutulan RNA'da tuz iyonu kalıntıları vardır.
Öneri: Tampon RW2'ye doğru hacimde etanol eklendiğini onaylayın ve işlem için belirtilen santrifüj hızında 2 saflaştırma kolonu yıkaması gerçekleştirin;herhangi bir tuz iyonu kalıntısı varsa, saflaştırma kolonunu oda sıcaklığında 5 dakika boyunca Tampon RW2'ye bırakın ve tuz kontaminasyonunun çıkarılmasını en üst düzeye çıkarmak için santrifüjleme yapın.
2. Yıkanmış RNA'da etanol kalıntısı.
Öneri: Tampon RW2 yıkamasından sonra, boş tüp santrifüjleme işlemini çalışma için belirtilen santrifüjleme hızında gerçekleştirin, hala etanol kalıntısı varsa boş tüp santrifüjleme işleminin süresini 2 dakikaya çıkarın veya etanol kalıntısının çıkarılmasını en üst düzeye çıkarmak için boş tüp santrifüjlemeden sonra 5 dakika oda sıcaklığında bırakın.
