Cell Direct RT qPCR Kiti—SYBR GREEN I Direct Cell Lisis Cell Ready Tek Adımlı qRT-PCR Kitleri
Açıklamalar
Bu kit, RT-qPCR reaksiyonları için kültürlenmiş hücre örneklerinden hızlı bir şekilde RNA salabilen benzersiz bir lizis tampon sistemi kullanır, böylece zaman alıcı ve zahmetli RNA saflaştırma sürecini ortadan kaldırır.RNA şablonu sadece 7 dakikada elde edilebilir.5×Doğrudan RT Karışımı ve 2×Kit tarafından sağlanan doğrudan qPCR Mix-SYBR reaktifleri, gerçek zamanlı kantitatif PCR sonuçlarını hızlı ve etkili bir şekilde elde edebilir.
5×Doğrudan RT Karışımı ve 2×Direct qPCR Mix-SYBR, güçlü inhibitör toleransına sahiptir ve numunelerin lizatı, doğrudan RT-qPCR için şablon olarak kullanılabilir.Bu kit, benzersiz RNA yüksek afiniteli Foregene ters transkriptaz ve Hot D-Taq DNA polimeraz, dNTP'ler, MgCl içerir2, reaksiyon tamponu, PCR optimize edici ve dengeleyici.
Özellikler
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit bileşenleri
| Bölüm I | Tampon CL |
| Foregene Proteaz Plus II | |
| Tampon ST | |
| Bölüm II | DNA Silgisi |
| 5× Doğrudan RT Karışımı | |
| 2× Doğrudan qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX Referans Boyası | |
| RNaz İçermeyen ddH2O | |
| Talimatlar | |
Özellikler ve avantajlar
■Basit ve etkili: Cell Direct RT teknolojisi ile RNA örnekleri sadece 7 dakikada alınabilir.
■ Numune talebi küçüktür, 10 hücre kadar düşük test edilebilir.
■ Yüksek verim: 384, 96, 24, 12, 6 kuyulu plakalarda kültürlenen hücrelerde RNA'yı hızla saptayabilir.
■ DNA Eraser, salınan genomları hızlı bir şekilde kaldırabilir ve sonraki deneysel sonuçlar üzerindeki etkiyi büyük ölçüde azaltabilir.
■ Optimize edilmiş RT ve qPCR sistemi, iki adımlı RT-PCR ters transkripsiyonunu daha verimli ve PCR'yi daha spesifik ve RT-qPCR reaksiyon inhibitörlerine karşı daha dirençli hale getirir.
Kit uygulaması
Uygulama kapsamı: kültürlenmiş hücreler.
- Örnek parçalanmasıyla salınan RNA: yalnızca bu kitin RT-qPCR şablonu için geçerlidir.
- Kit aşağıdaki amaçlar için kullanılabilir: gen ekspresyonu analizi, siRNA aracılı gen susturma etkisinin doğrulanması, ilaç taraması vb.
Diyagram
Depolama ve Raf ömrü
Bu kitin I. Kısmı 4°C'de saklanmalıdır;Kısım II -20°C'de saklanmalıdır.
Foregene Protease Plus II 4'te saklanmalıdır.℃, -20 ℃'de dondurmayın.
reaktif 2×Doğrudan qPCR Mix-SYBR -20'de saklanmalıdır℃karanlıkta;sık kullanılırsa 4'te de saklanabilir℃ kısa süreli depolama için (10 gün içinde tüketin).
Real Time PCR primer tasarım ilkeleri
İleri Astar ve Ters Astar
Real Time PCR için primer tasarımı çok önemlidir.Primerler, PCR amplifikasyonunun özgüllüğü ve etkinliği ile ilgilidir ve aşağıdaki ilkelere göre tasarlanabilir:
Astar uzunluğu: 18-30bp.
GC içeriği: %40-60.
Tm değeri: Primer 5 gibi primer tasarım yazılımları primerin Tm değerini verebilir.Yukarı ve aşağı primerlerin Tm değerleri mümkün olduğu kadar yakın olmalıdır.Tm hesaplama formülü de kullanılabilir: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR yapılırken, genellikle 5 °C'lik primer Tm değerinin altındaki bir sıcaklık, tavlama sıcaklığı olarak seçilir (tavlama sıcaklığındaki karşılık gelen artış, PCR reaksiyonunun özgüllüğünü artırabilir).
Primerler ve PCR ürünleri:
Tasarım primeri PCR amplifikasyon ürünü uzunluğu tercihen 100-150bp'dir.
Şablonun ikincil yapısal alanındaki tasarım astarlarından mümkün olduğunca kaçınılmalıdır.
Yukarı ve aşağı primerlerin 3' uçları arasında 2 veya daha fazla tamamlayıcı baz oluşumundan kaçının.
Primer 3' terminal tabanı, ardışık 3 ek G veya C ile mevcut olamaz.
Primerlerin kendileri tamamlayıcı yapılara sahip olamazlar, aksi takdirde PCR amplifikasyonunu etkileyen saç tokası bir yapı oluşacaktır.
ATCG, primer sekansında mümkün olduğu kadar eşit dağıtılmalı ve T olarak 3' terminal tabanından kaçınılmalıdır.
Ek 1：Cell Direct RT-qPCR Kit bileşen ek paketi
1.Hücre Parçalama Çözümü
|
| |||
| Kit bileşenleri (24 kuyulu lizis sistemi / kuyu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ton | 500 ton | ||
| ParçaBEN | Tampon CL | 20 mi | 100 mi |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 ul | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 mi | |
| ParçaIII | DNA Silgisi | 400 ul | 1 ml × 2 |
2.RT Karışımı
|
| |
| Kit bileşenleri (20 ul reaksiyon sistemi) | DRT-01011-B1 |
| 200 ton | |
| 5× Doğrudan RT Karışımı | 800 ul |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit bileşenleri (20 ul reaksiyon sistemi) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ton | 1000 ton | |
| 2× Doğrudan qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX Referans Boyası | 40 ul | 200 ul |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1.7 ml | 10 mi |
Kullanım kılavuzları:
