(96 kuyulu) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kiti – Taqman
Açıklamalar
bu(96 kuyulu) QuickEasyTM Hücre Direkt RT-qPCR Kiti–Takmansağlarbenzersiz bir lizis tampon sistemito hızlı bir şekilde RNA'yı serbest bırakınkültürlenmiş hücredenRT-qPCR reaksiyonları için örnekler, zaman alıcı ve zahmetli işlemleri ortadan kaldırırRNA saflaştırma işlemi ve gerekli RNA şablonunu elde etmek yalnızca 7 dakika sürer.bu5× Doğrudan RT KarışımıVe2× Doğrudan qPCR Mix-SYBRkutuda sağlanan hızlı veetkin bir şekilde gerçek zamanlı kantitatif elde edinPCR sonuçları.
5× Direct RT Mix ve 2× Direct qPCR Mix-Taqman, güçlü inhibitör toleransına sahiptir ve test edilecek numunenin lizatını verimli ters transkripsiyon ve spesifik amplifikasyon için bir şablon olarak kullanabilir.Reaktif, RNA için yüksek afiniteye sahip benzersiz Foregene Reverse Transkriptazın yanı sıra Sıcak D-Taq DNA Polimeraz, dNTP'ler, MgCl içerir.2 , reaksiyon tamponu, PCR optimize edici ve stabilizatör ve numuneyi hızlı, kolay ve doğru bir şekilde tespit etmek için lizis tamponu ile birlikte kullanılabilir ve yüksek hassasiyet, güçlü özgüllük ve iyi stabilite özelliklerine sahiptir.
Kit, 96 oyuklu kültürlenmiş hücrelerin mikro sistem lizisini hedeflemektedir ve iyi bir tekdüzelik ve tutarlılığa sahiptir;kit bileşenleri, tek seferlik kullanım için 96 kuyulu hücre plakasını karşılayabilen 96 lizis reaksiyonu, 96 ters transkripsiyon reaksiyonu ve 96×2 qPCR reaksiyonu sağlar ve reaktiflerin tekrar tekrar açılması, dondurulması ve çözülmesinden ve reaktif performansının bozulmasından kaynaklanan kirliliği önler.
Kit bileşenleri
| Kit bileşimi ( 50 μL lizis sistemi/20 uLRT reaksiyon sistemi /20μL qPCR reaksiyon sistemi) | DRT-03021 | açıklama | |
| 96T | |||
| ParçaI | TamponCL | 5 mL | HücreLizis |
| foregeneProteaz Artı II | 100 μL | ||
| TamponST | 500 μL | ||
| Parça II | DNASilgi | 100 μL | |
| 5× Doğrudan RT Karışımı | 400 μL | RT | |
| 2× Doğrudan qPCR Karışımı-takman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Referans Boyası | 400µL | ||
| RNaz- Özgürgg2 O | 1.7mL |
| |
| Myıllık | 1 parça | 1 porsiyon | |
*: Parçalama reaktifi DNA Eraser, kitin II. Bölümünde yer alır;Hücre Parçalama, RT ve qPCR bileşenleri ayrıca satın alınabilir.
Özellikler ve avantajlar
■Basit ve etkili: Cell Direct RT teknolojisi ile RNA örnekleri sadece 7 dakikada alınabilir.
■ Numune talebi küçüktür, 10 hücre kadar düşük test edilebilir.
■ Yüksek verim: 384, 96, 24, 12, 6 kuyulu plakalarda kültürlenen hücrelerde RNA'yı hızla saptayabilir.
■ DNA Eraser, salınan genomları hızlı bir şekilde kaldırabilir ve sonraki deneysel sonuçlar üzerindeki etkiyi büyük ölçüde azaltabilir.
■ Optimize edilmiş RT ve qPCR sistemi, iki adımlı RT-PCR ters transkripsiyonunu daha verimli ve PCR'yi daha spesifik ve RT-qPCR reaksiyon inhibitörlerine karşı daha dirençli hale getirir.
Kit uygulaması
Uygulama kapsamı: kültürlenmiş hücreler.
- Örnek parçalanmasıyla salınan RNA: yalnızca bu kitin RT-qPCR şablonu için geçerlidir.
- Kit aşağıdaki amaçlar için kullanılabilir: gen ekspresyonu analizi, siRNA aracılı gen susturma etkisinin doğrulanması, ilaç taraması vb.
Depolama ve Raf ömrü
Bu kitin I. Kısmı 4'te saklanmalıdır.℃;Kısım II -20°C'de saklanmalıdır.
Foregene Protease Plus II 4'te saklanmalıdır.℃, -20 ℃'de dondurmayın.
reaktif 2×Doğrudan qPCR Mix-Taqman -20'de saklanmalıdır℃karanlıkta;sık kullanılırsa 4'te de saklanabilir℃ kısa süreli depolama için (10 gün içinde tüketin).
Real Time PCR primer tasarım ilkeleri
İleri Astar ve Ters Astar
Real Time PCR için primer tasarımı çok önemlidir.Primerler, PCR amplifikasyonunun özgüllüğü ve etkinliği ile ilgilidir ve aşağıdaki ilkelere göre tasarlanabilir:
- Astar uzunluğu: 18-30bp.
- GC içeriği: %40-60.
- Tm değeri: Primer 5 gibi primer tasarım yazılımları primerin Tm değerini verebilir.Yukarı ve aşağı primerlerin Tm değerleri mümkün olduğu kadar yakın olmalıdır.Tm hesaplama formülü de kullanılabilir: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR yapılırken, genellikle 5 °C'lik primer Tm değerinin altındaki bir sıcaklık, tavlama sıcaklığı olarak seçilir (tavlama sıcaklığındaki karşılık gelen artış, PCR reaksiyonunun özgüllüğünü artırabilir).
- Primerler ve PCR ürünleri:
- Tasarım primeri PCR amplifikasyon ürünü uzunluğu tercihen 100-150bp'dir.
- Şablonun ikincil yapısal alanındaki tasarım astarlarından mümkün olduğunca kaçınılmalıdır.
- Yukarı ve aşağı primerlerin 3' uçları arasında 2 veya daha fazla tamamlayıcı baz oluşumundan kaçının.
- Primer 3' terminal tabanı, ardışık 3 ek G veya C ile mevcut olamaz.
- Primerlerin kendileri tamamlayıcı yapılara sahip olamazlar, aksi takdirde PCR amplifikasyonunu etkileyen saç tokası bir yapı oluşacaktır.
- ATCG, primer sekansında mümkün olduğu kadar eşit dağıtılmalı ve T olarak 3' terminal tabanından kaçınılmalıdır.
Ek1:Cell DoğrudanRT-qPCR Kit bileşenlerit ek paket
1. Hücre Parçalama Çözümü
| Hücre Parçalama Çözümü | |||
| Kit bileşenleri (24 kuyulu lizis sistemi / kuyu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ton | 500 ton | ||
| ParçaBEN | Tampon CL | 20 mi | 100 mi |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 ul | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 mi | |
| ParçaIII | DNA Silgisi | 400 ul | 1 ml × 2 |
| RT Karışımı | |
| Kit bileşenleri (20 ul reaksiyon sistemi) | DRT-01011-B1 |
| 200 ton | |
| 5× Doğrudan RT Karışımı | 800 ul |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Karışımı | ||
| Kit bileşenleri (20 ul reaksiyon sistemi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ton | 1000 ton | |
| 2× Doğrudan qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Referans Boyası | 40 ul | 200 ul |
| RNaz İçermeyen ddH2O | 1.7 ml | 10 mi |
Kullanım kılavuzları:
