Bukkal Swab/FTA Kartı DNA İzolasyon Kiti Bukkal Swablardan Genomik DNA Ekstraksiyonu veya Saflaştırma Kiti
Takım Açıklaması:
Bukkal sürüntü/FTA Kartı örneklerinden yüksek kaliteli genomik DNA'yı hızla arındırın.
◮RNaz kontaminasyonu yok:Kit tarafından sağlanan Yalnızca DNA Sütunu, deney sırasında RNaz eklemeden RNA'nın genomik DNA'dan çıkarılmasını mümkün kılar ve laboratuvarın eksojen RNaz ile kontamine olmasını önler.
◮Hızlı hız:Foregene Protease, benzer proteazlardan daha yüksek aktiviteye sahiptir ve doku örneklerini hızla sindirir;operasyon basittir ve genomik DNA ekstraksiyon operasyonu 20-80 dakika içinde tamamlanabilir.
◮Uygun:Santrifüjleme, oda sıcaklığında gerçekleştirilir ve 4°C düşük sıcaklıkta santrifüjlemeye veya DNA'nın etanolle çökeltilmesine gerek yoktur.
◮Emniyet:Organik reaktif ekstraksiyonu gerekmez.
◮Yüksek kalite:Ekstrakte edilen genomik DNA, çeşitli deneylerin gereksinimlerini karşılayabilen büyük fragmanlara, RNA'ya, RNaz'a ve son derece düşük iyon içeriğine sahiptir.
◮Mikro elüsyon sistemi:Aşağı akış tespiti veya deney için uygun olan genomik DNA konsantrasyonunu artırabilir.
Tanım
Bu kit, bukkal swablardan ve FTA Kartından (kan lekeleri) yüksek konsantrasyonlu genomik DNA elde etmek için etkili ve hızlı bir yöntem sağlar.Şirketimizi kullanmak'Foregene Protease, yüksek konsantrasyonlu, yüksek kaliteli genomik DNA ile birleştirilmiş benzersiz sadece DNA içeren silika membran döndürme kolonu ve formülü, 80 dakikada ekstrakte edilebilir.Özel olarak tasarlanmış küçük saflaştırma kolonu, genomik DNA'yı bağlar ve DNA, küçük bir miktar (Elde edilen genomik DNA'nın konsantrasyonunu artırmak için 15μl) elüsyon sistemi, aşağı yönde tespit veya deney için uygundur.Kit, bir seferde bir veya daha fazla örneği işleyebilir ve saflaştırma işlemi, fenol, kloroform gibi organik maddelerin ekstraksiyonu ve zaman alıcı izopropanol veya etanol çökeltmesi gerektirmez ve işlem basit ve zaman kazandırır.
Özellikler
50 Hazırlık
Kit bileşenleri
| Tampon ST1 |
| Tampon ST2 |
| Doğrusal Akrilamid |
| Tampon PW |
| Tampon WB |
| Tampon EB |
| Foregene Proteaz |
| Yalnızca DNA Sütunu |
| Talimatlar |
Özellikler ve avantajlar
-RNaz kontaminasyonu yok: Kit tarafından sağlanan Yalnızca DNA Sütunu, deney sırasında RNaz eklemeden RNA'nın genomik DNA'dan çıkarılmasını mümkün kılar ve laboratuvarın eksojen RNaz ile kontamine olmasını önler.
-Hızlı hız: Foregene Protease, benzer proteazlardan daha yüksek aktiviteye sahiptir, numuneleri hızlı bir şekilde sindirir;basit operasyon.
-Uygun: Santrifüjleme oda sıcaklığında gerçekleştirilir ve 4°C düşük sıcaklıkta santrifüjlemeye veya DNA'nın etanolle çökeltilmesine gerek yoktur.
-Güvenlik: Organik reaktif ekstraksiyonu gerekmez.
-Yüksek kalite: Ekstrakte edilen genomik DNA, çeşitli deneylerin gereksinimlerini karşılayabilecek büyük parçalara, RNA'ya, RNaz'a ve son derece düşük iyon içeriğine sahiptir.
-Mikro elüsyon sistemi: Aşağı yönde tespit veya deney için uygun olan genomik DNA konsantrasyonunu artırabilir.
Kit uygulaması
Aşağıdaki örneklerden genomik DNA'nın saflaştırılması için uygundur: yanak sürüntüleri, FTA Kartı (kan lekeleri).
Depolama ve Raf ömrü
-Bu kit kuru koşullarda oda sıcaklığında (15-25°C) 12 ay saklanabilir;daha uzun süre saklanması gerekiyorsa 2-8°C'de saklanabilir.
Not: Düşük sıcaklıkta saklanırsa çözelti çökelmeye eğilimlidir.Kullanmadan önce kit içindeki solüsyonu bir süre oda sıcaklığında tuttuğunuzdan emin olun.Gerekirse çökeltiyi çözmek için 37°C su banyosunda 10 dakika önceden ısıtın ve kullanmadan önce karıştırın.
-Foregene Protease solüsyonu, oda sıcaklığında uzun süre (3 ay) saklandığında aktif olan benzersiz bir formüle sahiptir;4°C'de saklandığında etkinliği ve kararlılığı daha iyi olacaktır, bu nedenle 4°C'de saklanması önerilir, -20°C'de saklamamaya dikkat edin.
Arıtma sütunu tıkalı
Bu kitte, genomik DNA ekstraksiyon işleminde, saflaştırma kolonu, santrifüjleme aşaması olmadan doğrudan numune enzimatik lizis karışımı üzerine adsorbe edilir ve numunenin eksik enzimizasyonu ve yüksek viskozitesi nedeniyle saflaştırma kolonu bloke edilebilir.
Aşağıdaki olası nedenler şunlardır:
1. Doku örneklerinin eksik enzimatik sindirimi.
Öneri: Foregene Protease'in numune işleme süresi uygun şekilde uzatılabilir veya süpernatan, 12.000 rpm'de (~13.400 × g) 5 dakika santrifüjlendikten sonra alınabilir.
2. Doku örneklerinin veya büyük dokuların aşırı kullanımı.
Öneri: Numunede 1 Bukkal swabı geçmemek en iyisidir;numune çok büyükse, buna göre Tampon ST1, Foregene Proteaz ve tampon ST2'nin dozunu artırın.
3. Numune viskozitesi çok yüksek.
Öneri: Numuneler, genomik DNA ekstraksiyonundan önce 10 mM Tris-HCl ile uygun şekilde seyreltilebilir.
4. Kan kartının parçaları emildi.
Öneri: Blood spot (FTA Card) genomik ekstraksiyonunun 6. adımının geçici santrifüj süresi uygun şekilde uzatılabilir.
Düşük verim veya DNA yok
Numune kaynağı, numune saklama koşulları, numune hazırlama, manipülasyon vb. dahil olmak üzere genellikle genomik DNA verimini etkileyen çeşitli faktörler vardır.
Ekstraksiyon sırasında genomik DNA elde edilemez
Olası nedenler aşağıdaki gibidir:
1. Numunelerin uygun olmayan şekilde saklanması veya çok uzun süre saklanması, genomik DNA bozulmasına yol açar.
Öneri: Oral sürüntülerden tercihen taze örnek alınmalıdır ve genomik DNA ekstraksiyon operasyonları için korunmuş sürüntülerin kullanılması önerilmez;kan lekesi numuneleri kaliteli olmalı ve saklama süresi çok uzun olmamalıdır.
2. Çok az doku kullanımı, karşılık gelen genomik DNA'nın çıkarılmamasına neden olabilir.
Öneri: Operasyon kılavuzundaki bukkal sürüntü örnekleme talimatlarını izleyin ve genomik DNA ekstraksiyonu için ağız sürüntüsüne yeterli sayıda hücre bağlanabilmesi için mümkün olduğu kadar çok kez silin;kan lekesi örneği ekstraksiyonu için kan lekesi kesme alanı uygun şekilde artırılabilir.
3. Foregene Protease uygun şekilde korunmamıştır, bu da aktivitesinde bir azalmaya veya inaktivasyona neden olur.
Öneri: Foregene Protease saklama koşullarını onaylayın veya enzimatik reaksiyon için yeni bir Foregene Protease ile değiştirin.
4. Kitin uygun olmayan şekilde saklanması veya saklama süresinin çok uzun olması, kit içindeki bazı bileşenlerin arızalanmasına neden olur.
Öneri: İlgili prosedürler için yeni bir Buccal swab DNA izolasyon kiti satın alın.
5. Tampon WB, mutlak etanol eklemez.
Öneri: Tampon WB'nin doğru hacimde mutlak etanol eklediğini onaylayın.
6. Eluent, silikon filme doğru şekilde eklenmemiş.
Öneri: Elüsyon etkinliğini artırmak için silikon membranın ortasına 65 °C önceden ısıtılmış eluent damlaları ekleyin ve oda sıcaklığında 5 dakika bekletin.
Düşük verimli genomik DNA izole edildi
Aşağıdaki olası nedenler şunlardır:
1. Numunelerin uygun olmayan şekilde saklanması veya çok uzun süre saklanması, genomik DNA bozulmasına yol açar.
Öneri: Oral sürüntülerden tercihen taze örnek alınır ve korunmuş sürüntüler genomik DNA ekstraksiyonu için kullanılmamalıdır.
2. Doku örneği miktarı çok küçükse, çıkarılan genomik DNA içeriği daha az olacaktır.
Öneri: Çalıştırma kılavuzundaki oral sürüntü örnekleme talimatlarını izleyin ve genomik DNA ekstraksiyonu için oral eküvyona yeterli sayıda hücre eklenebilmesi için mümkün olduğu kadar çok kez silin.
3. Foregene Protease uygun şekilde korunmamıştır, bu da aktivitesinde bir azalmaya veya inaktivasyona neden olur.
Öneri: Foregene Protease saklama koşullarını onaylayın veya enzimatik reaksiyon için yeni bir Foregene Protease ile değiştirin.
4. Eluent problemleri.
Öneri: Elüsyon için Tampon EB kullanın;ddH kullanılıyorsa2O veya diğer eluentler, elüatın pH'ının 7,0-8,5 arasında olduğunu onaylayın.
5. Elüat doğru şekilde damla damla eklenmemiştir.
Öneri: Elüsyon etkinliğini artırmak için silikon membranın ortasına eluent damlaları ekleyin ve oda sıcaklığında 5 dakika bekletin.
6. Elüsyon sıvısı çok az birikiyor.
Öneri: Talimatlarda gerektiği gibi genomik DNA elüsyonu için elüent kullanın, en az 15 µl.
İzole edilen genomik DNA'nın düşük saflığı
Düşük genomik DNA saflığı, aşağı akış deneylerinin başarısızlığına veya tatmin edici olmayan sonuçlarına yol açabilir, örneğin: enzimler kesilip açılamıyor, PCR ilgilenilen gen parçasını alamıyor, vb.
Olası nedenler aşağıdaki gibidir:
1. Heteroprotein kirliliği, RNA kirliliği.
Analiz: Saflaştırma kolonu, Tampon PW kullanılarak yıkanmadı;Tampon PW yıkama saflaştırma kolonu, doğru santrifüj hızı kullanılarak yıkanmadı.
Öneri: Etanol eklemeden önce süpernatanda çökelme olmadığından emin olun;arıtma kolonunu talimatlara göre yıkadığınızdan emin olun ve bu adım atlanamaz.
2. Safsızlık iyon kirliliği.
Analiz: Tampon WB yıkama saflaştırma kolonu çıkarıldı veya yalnızca bir kez yıkandı, bu da artık iyonik kontaminasyona neden oldu.
Öneri: Kalıntı iyonları olabildiğince uzaklaştırmak için Tampon WB'yi belirtilen şekilde 2 kez yıkadığınızdan emin olun.
3. RNA enzim kontaminasyonu.
Analiz: Yabancı RNazlar tampona eklendi;Tampon PW yıkama işlemi yanlıştı ve in vitro transkripsiyon gibi aşağı akış RNA deneysel işlemlerini etkileyen RNaz kalıntılarına neden oldu.
Öneri: Foregene serisi nükleik asit izolasyon kitleri, ilave RNaz ilavesi olmadan RNA'yı uzaklaştırabilir, dolayısıyla bukkal Swab/FTA Kartı DNA İzolasyon Kitinin RNaz eklemesine gerek yoktur;Tampon PW yıkama saflaştırma sütunu için talimatları izlediğinizden emin olun ve bu adım atlanamaz.
4. Etanol kalıntısı.
Analiz: Tampon WB, saflaştırma kolonunu yıkadıktan sonra boş tüp santrifüjü gerçekleştirmedi.
Öneri: Talimatlara göre doğru boş tüp santrifüj işlemini gerçekleştirin.
5. Diğer safsızlık kirliliği.
Analiz: Kayıtlı numuneler veya özel numuneler ön işleme tabi tutulmaz.
Öneri: Numuneyi talimatlara göre iyice ön işleme tabi tutun.
