Escherichia Coli O157: H7 Nükleik Asit Saptama Kiti (PCR Floresan Prob Metodu/Liyofilizasyon)
Takım Açıklaması:
Kat.No.FP103
Gıda, yem, su numuneleri ve çevre numunelerinde E. coli O157:H7'nin hızlı tespiti ve taranması için kullanılır.
Açıklamalar
İçin kullanılırgıda, yem, su numuneleri ve çevresel numunelerde E. coli O157:H7'nin hızlı tespiti ve taranması.
[Test prensibi]
Floresan PCR teknolojisi ilkesine göre, Escherichia coli O157: H7'nin spesifik geni için spesifik primerler ve Taqman probları tasarlanır ve Escherichia coli O157: H7 DNA'nın kalitatif tespitini gerçekleştirmek için bir floresan PCR cihazı tarafından tespit edilir.
Kit İçeriği
Not: ROX kanal probu dahil değildir.
| Cbileşenler | Şartname | Qküçüklük |
| Tampon A | Tüp | 1 |
| Tampon B | Tüp | 1 |
| Pozitif kontrol | Tüp | 1 |
| Negatif kontrol | Tüp | 1 |
Beklenen Kullanım
İçin kullanılır gıda, yem, su numuneleri ve çevresel numunelerde E. coli O157:H7'nin hızlı tespiti ve taranması.
Saklama Koşulları ve Son Kullanma Tarihi
-20°C'de karanlıkta saklayın ve tekrar tekrar dondurma ve çözme işleminden kaçının.
geçerlilik süresi 12ay ve üretim tarihi dış ambalajın üzerinde gösterilir.
Aletler ve Sarf Malzemeleri
Floresan kantitatif PCR cihazı, pipet tabancası ve uygun uçlar, vorteks çalkalayıcı, mini santrifüj.
kullanım
1. Örnek İşleme
1.1 Numune tipi: Bu kit, Escherichia coli O157:H7 ile kontamine olduğundan şüphelenilen gıda, yem, su numuneleri ve diğer numuneler için uygundur.Pigment içeren derin işlenmiş et ürünleri, içecekler ve diğer maddeler için, floresans sinyali toplamayı etkilememek için bunların durulanması gerekir.
1.2 Numune işleme: Numune hazırlama, zenginleştirme kültürü ve Escherichia coli O157: H7 izolasyonu için "GB 4789.10-2016 Gıda Güvenliği Ulusal Standardı Escherichia coli O157 Gıda Mikrobiyolojik Muayenesi: H7 Testi"ne bakın.
- Nnükleik asit ekstraksiyonu
1,5 mL'lik bir santrifüj tüpüne 20 mL zenginleştirme solüsyonu alın, 200 μL mikrobiyal lizat ekleyin (ilave kit gereklidir), 30 saniye vorteksleyin, kısaca santrifüjleyin ve bir kenara koyun.
Açıklamalar: Lizattan nükleik asidin ekstraksiyonu 10 dakika içinde tamamlanmalıdır ve uzun süre saklanamaz.
3. Nükleik Asit Amplifikasyonu
3.1 Kullanım için floresan kantitatif PCR cihazını açın.
Kitteki Tampon A ve Tampon B'yi iyice eritin ve kısa süre santrifüjleyin.Her PCR reaksiyon tüpüne 18 μL Tampon A ve 2 μL Tampon B ekleyin.Daha sonra PCR reaksiyon tüplerine negatif kontrol, ekstrakte edilmiş nükleik asit ve pozitif kontrolün her birinden 5 mL ekleyin, tüplerin kapağını kapatın ve kısaca santrifüjleyin.
3.3 PCR reaksiyon tüpünü bir floresan PCR makinesine aktarın ve amplifikasyon deneyleri yapmak için aşağıdaki prosedürleri kullanın: reaksiyon sistemi için 25 mL seçin, her döngü için 60°C'de floresan sinyalleri toplayın ve saptama kanalı için FAM'yi seçin.
| Adım | programı | Döngü sayısı |
| 1 | 37°C 5dk | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3dk | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60°C 30s (floresan toplayın) |
Sorun analizi için kılavuzlar
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Hiçbir RNA ekstrakte edilemez veya nükleik asit verimi düşüktür
Genellikle geri kazanım verimliliğini etkileyen birçok faktör vardır, örneğin: numune RNA içeriği, çalışma yöntemi, elüsyon hacmi, vb.
Yaygın nedenlerin analizi：
1.Çalışma sırasında buz banyosu veya düşük sıcaklıkta (4 °C) santrifüjleme.
Öneri: Oda sıcaklığında (15-25°C) çalışma, kesinlikle buz banyosu ve düşük sıcaklıkta santrifüj.
2. Uygun olmayan numune saklama veya numuneyi çok uzun süre saklama.
Öneri: Numuneleri -80 °C'de saklayın veya sıvı nitrojen içinde dondurun ve tekrarlanan donma-çözülme kullanımından kaçının;RNA ekstraksiyonu için yeni toplanmış örnekleri kullanmayı deneyin.
3. Yetersiz numune parçalanması
Öneri: Lütfen numune ve çalışma solüsyonunun (Lineer Akrilamid) iyice karıştırıldığından ve oda sıcaklığında (15-25 °C) 10 dakika inkübe edildiğinden emin olun.
4. Eluent yanlış eklendi
Öneri: Saflaştırma sütununun zarının ortasına RNaz İçermeyen ddH2O eklendiğinden emin olun.
5. Tampon viRW2'de uygun olmayan susuz etanol hacmi
Öneri: Lütfen talimatları izleyin, Buffer viRW2'ye doğru hacimde susuz etanol ekleyin ve kiti kullanmadan önce iyice karıştırın.
6.Yanlış numune kullanımı.
Öneri: 500μl Buffer viRL başına 200μl numune.Aşırı numune hacmi, RNA ekstraksiyon oranının düşmesine neden olur.
7. Uygun olmayan elüsyon hacmi veya eksik elüsyon.
Öneri: Saflaştırma kolonunun eluent hacmi 30-50μl'dir;elüsyon etkisi tatmin edici değilse önceden ısıtılmış RNaz İçermeyen ddH eklenmesi önerilir2O ve 5-10dk gibi oda sıcaklığında yerleştirme süresini uzatın
8. Saflaştırma sütununda Tampon viRW2 içinde durulandıktan sonra etanol kalıntısı var.
Öneri: Tampon viRW2 içinde durulandıktan ve 2 dakika boş tüp santrifüjlendikten sonra hala etanol kalırsa, saflaştırma kolonu, kalan etanolü tamamen çıkarmak için boş tüp santrifüjlemeden sonra 5 dakika oda sıcaklığında bırakılabilir.
Saflaştırılmış RNA moleküllerinin bozunması
Saflaştırılmış RNA'nın kalitesi örneğin saklanması, RNaz kontaminasyonu ve çalışması gibi faktörlerle ilişkilidir.
Yaygın nedenlerin analizi：
1. Toplanan numuneler zamanında kaydedilmedi.
Öneri: Numune toplandıktan sonra zamanında kullanılmazsa, lütfen hemen -80 ℃'de veya sıvı nitrojende saklayın.RNA moleküllerinin ekstraksiyonu için, mümkün olduğunda taze toplanmış numuneleri kullanmaya çalışın.
2. Toplanan numuneler tekrar tekrar dondurulup çözülüyordu.
Öneri: Numune toplama ve saklama sırasında tekrar tekrar dondurma ve çözme işleminden (bir defadan fazla) kaçının, aksi takdirde nükleik asit verimi azalır.
3.RNase ameliyathanede tanıtıldı veya tek kullanımlık eldiven, maske vb. giyilmedi.
Öneri: RNA moleküllerinin ekstraksiyonu deneyi en iyi şekilde ayrı bir RNA ameliyathanesinde yapılır ve deney masası deneyden önce temizlenir.RNase girişinin neden olduğu RNA bozulmasını önlemek için deney sırasında tek kullanımlık eldivenler ve maskeler giyin.
4. Reaktif, kullanım sırasında RNase ile kontamine olur.
Öneri: İlgili deneyler için yeni Viral RNA İzolasyon Kiti ile değiştirin.
5. Santrifüj tüplerinin, pipet uçlarının vb. RNaz kontaminasyonu. Öneri: Santrifüj tüplerinin, pipet uçlarının ve pipetlerin RNaz İçermediğinden emin olun.
Saflaştırılmış RNA molekülleri aşağı akış deneylerini etkiledi
Ters transkripsiyon, Northern Blot, vb. gibi çok fazla tuz iyonu veya protein varsa, saflaştırma sütunu tarafından saflaştırılan RNA molekülleri aşağı akış deneylerini etkileyecektir.
1. Ayrılan RNA moleküllerinde kalan tuz iyonları vardır.
Öneri: Buffer viRW2'ye doğru hacimde susuz etanol eklendiğinden emin olun ve saflaştırma kolonunu çalıştırma talimatlarındaki doğru santrifüjleme hızına göre iki kez yıkayın; Hala tuz iyonları varsa, saflaştırma kolonuna Tampon viRW2 ekleyebilir ve 5 dakika oda sıcaklığında bırakabilirsiniz.Ardından, tuz iyonları kontaminasyonunu büyük ölçüde gidermek için santrifüjleme yapın
2. Ayrılan RNA moleküllerinde kalan etanol var
Öneri: Saflaştırma sütunlarının Buffer viRW2 tarafından durulandığını onayladıktan sonra, çalıştırma talimatlarındaki santrifüj hızına göre boş tüp santrifüjleme gerçekleştirin.Hala etanol kalmışsa, kalan etanolün büyük ölçüde uzaklaştırılması için boş tüp santrifüjlemeden sonra 5 dakika oda sıcaklığında bırakılabilir.
Kullanım kılavuzları:
Viral RNA İzolasyon Kiti Kullanım Kılavuzu
