Sorun analizi için kılavuzlar

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Hiçbir RNA ekstrakte edilemez veya nükleik asit verimi düşüktür

Genellikle geri kazanım verimliliğini etkileyen birçok faktör vardır, örneğin: numune RNA içeriği, çalışma yöntemi, elüsyon hacmi, vb.

Yaygın nedenlerin analizi：

1.Çalışma sırasında buz banyosu veya düşük sıcaklıkta (4 °C) santrifüjleme.

Öneri: Oda sıcaklığında (15-25°C) çalışma, kesinlikle buz banyosu ve düşük sıcaklıkta santrifüj.

2. Uygun olmayan numune saklama veya numuneyi çok uzun süre saklama.

Öneri: Numuneleri -80 °C'de saklayın veya sıvı nitrojen içinde dondurun ve tekrarlanan donma-çözülme kullanımından kaçının;RNA ekstraksiyonu için yeni toplanmış örnekleri kullanmayı deneyin.

3. Yetersiz numune parçalanması

Öneri: Lütfen numune ve çalışma solüsyonunun (Lineer Akrilamid) iyice karıştırıldığından ve oda sıcaklığında (15-25 °C) 10 dakika inkübe edildiğinden emin olun.

4. Eluent yanlış eklendi

Öneri: Saflaştırma sütununun zarının ortasına RNaz İçermeyen ddH2O eklendiğinden emin olun.

5. Tampon viRW2'de uygun olmayan susuz etanol hacmi

Öneri: Lütfen talimatları izleyin, Buffer viRW2'ye doğru hacimde susuz etanol ekleyin ve kiti kullanmadan önce iyice karıştırın.

6.Yanlış numune kullanımı.

Öneri: 500μl Buffer viRL başına 200μl numune.Aşırı numune hacmi, RNA ekstraksiyon oranının düşmesine neden olur.

7. Uygun olmayan elüsyon hacmi veya eksik elüsyon.

Öneri: Saflaştırma kolonunun eluent hacmi 30-50μl'dir;elüsyon etkisi tatmin edici değilse önceden ısıtılmış RNaz İçermeyen ddH eklenmesi önerilir₂O ve 5-10dk gibi oda sıcaklığında yerleştirme süresini uzatın

8. Saflaştırma sütununda Tampon viRW2 içinde durulandıktan sonra etanol kalıntısı var.

Öneri: Tampon viRW2 içinde durulandıktan ve 2 dakika boş tüp santrifüjlendikten sonra hala etanol kalırsa, saflaştırma kolonu, kalan etanolü tamamen çıkarmak için boş tüp santrifüjlemeden sonra 5 dakika oda sıcaklığında bırakılabilir.

Saflaştırılmış RNA moleküllerinin bozunması

Saflaştırılmış RNA'nın kalitesi örneğin saklanması, RNaz kontaminasyonu ve çalışması gibi faktörlerle ilişkilidir.

Yaygın nedenlerin analizi：

1. Toplanan numuneler zamanında kaydedilmedi.

Öneri: Numune toplandıktan sonra zamanında kullanılmazsa, lütfen hemen -80 ℃'de veya sıvı nitrojende saklayın.RNA moleküllerinin ekstraksiyonu için, mümkün olduğunda taze toplanmış numuneleri kullanmaya çalışın.

2. Toplanan numuneler tekrar tekrar dondurulup çözülüyordu.

Öneri: Numune toplama ve saklama sırasında tekrar tekrar dondurma ve çözme işleminden (bir defadan fazla) kaçının, aksi takdirde nükleik asit verimi azalır.

3.RNase ameliyathanede tanıtıldı veya tek kullanımlık eldiven, maske vb. giyilmedi.

Öneri: RNA moleküllerinin ekstraksiyonu deneyi en iyi şekilde ayrı bir RNA ameliyathanesinde yapılır ve deney masası deneyden önce temizlenir.RNase girişinin neden olduğu RNA bozulmasını önlemek için deney sırasında tek kullanımlık eldivenler ve maskeler giyin.

4. Reaktif, kullanım sırasında RNase ile kontamine olur.

Öneri: İlgili deneyler için yeni Viral RNA İzolasyon Kiti ile değiştirin.

5. Santrifüj tüplerinin, pipet uçlarının vb. RNaz kontaminasyonu. Öneri: Santrifüj tüplerinin, pipet uçlarının ve pipetlerin RNaz İçermediğinden emin olun.

Saflaştırılmış RNA molekülleri aşağı akış deneylerini etkiledi

Ters transkripsiyon, Northern Blot, vb. gibi çok fazla tuz iyonu veya protein varsa, saflaştırma sütunu tarafından saflaştırılan RNA molekülleri aşağı akış deneylerini etkileyecektir.

1. Ayrılan RNA moleküllerinde kalan tuz iyonları vardır.

Öneri: Buffer viRW2'ye doğru hacimde susuz etanol eklendiğinden emin olun ve saflaştırma kolonunu çalıştırma talimatlarındaki doğru santrifüjleme hızına göre iki kez yıkayın; Hala tuz iyonları varsa, saflaştırma kolonuna Tampon viRW2 ekleyebilir ve 5 dakika oda sıcaklığında bırakabilirsiniz.Ardından, tuz iyonları kontaminasyonunu büyük ölçüde gidermek için santrifüjleme yapın

2. Ayrılan RNA moleküllerinde kalan etanol var

Öneri: Saflaştırma sütunlarının Buffer viRW2 tarafından durulandığını onayladıktan sonra, çalıştırma talimatlarındaki santrifüj hızına göre boş tüp santrifüjleme gerçekleştirin.Hala etanol kalmışsa, kalan etanolün büyük ölçüde uzaklaştırılması için boş tüp santrifüjlemeden sonra 5 dakika oda sıcaklığında bırakılabilir.

Kullanım kılavuzları:

Viral RNA İzolasyon Kiti Kullanım Kılavuzu