Doğrudan RT-qPCR Kiti II
Takım Açıklaması:
◮Benzersiz reaksiyon tamponu ile Foregene tarafından geliştirilen Foreasy Reverse Transkriptaz ve Foreasy HS Taq DNA Polimeraz kullanan Direct RT-qPCR Kiti, bu kiti güçlü direnç ve uyumlulukla yapar ve Foregene Lysis sistemini şablon olarak kullanan reaksiyonu doğrudan test edebilir.Bu kit, COVID-19 nükleik asit tespit kiti ve diğer patojenik bakteri nükleik asit tespit kiti geliştirme için geçerli olabilir.
Tanım
Doğrudan RT-qPCR Kiti, ayrı paketlenmiş RT-qPCR tamponu, yüksek verimli Foreasy HS Taq DNA Polimeraz sağlarve Foreasy Ters Transkriptaz (MMLV),basit doğrulama içinde arka uç kitlerinin oluşturulması ve sistem ayarı için uygun hale getirir.
Benzersiz reaksiyon tamponu ile Foregene tarafından geliştirilen Foreasy Reverse Transkriptaz ve Foreasy HS Taq DNA Polimeraz kullanan Direct RT-qPCR Kiti, bu kiti güçlü direnç ve uyumlulukla yapar ve Foregene Lysis sistemini şablon olarak kullanan reaksiyonu doğrudan test edebilir.Bu kit, COVID-19 nükleik asit tespit kiti ve diğer patojenik bakteri nükleik asit tespit kiti geliştirme için geçerli olabilir.
Bu kit, kolayca ve hızlı bir şekilde kullanılarak doğrudan IVD ürününün bileşeni olabilir.Yeniden geliştirmeden yalnızca kolay doğrulamaya ihtiyaç duyar.
Özellikler
500T, 50.000T
Kit bileşenleri
| Kit içeriği (20 μL reaksiyon sistemi) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ton | 50.000 ton | |
| kolay Rters transkriptaz (200Ü/μL) | 50 uL×1 | 1 mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimeraz (5Ü/μL) | 100 uL×1 | 1 mL×10 |
| 2× Doğrudan RT-qPCRTampon | 1 mL ×5 | 500 mL ×1 |
| Talimat | 1 | 1 |
Çalıştırma Adımları
A: Şablon ve reaktifi hazırlayın
1. Hazırlanan RNA şablonunu (RNA şablonunu ekstrakte etmek ve saflaştırmak için Foregene Total RNA Isolation Kit serisi kitinin kullanılması önerilir) veya örnek parçalama ürünü (Foregene Lysis sistemi kullanılması önerilir), spesifik primerler (10 μM) ve diğer ilgili sarf malzemeleri, alet hazırlayın.
2. 2× Doğrudan RT-qPCR Tamponunu, RNazsız ddH2O'yu ve 20× ROX Referans Boyasını (gerekirse) buzla birlikte kutuya koyun, bunların doğal olarak erimesini sağlayın ve hafifçe karıştırın.
B: RT-qPCR sisteminin hazırlanması
Reaksiyon sisteminin reaksiyon tamponunun hacminin yarısını alın (örneğin, sistemin hacmi 20 μL ise, 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer alması gerekir)). İçinkarşılık gelen miktarda enzim, bunu öneriyoruzM-MLV：10-30 U/20 μL reaksiyon sistemi,takDNA polimeraz：1-2 U/20 μL reaksiyon sistemiBu bizim önerimiz, test etmeli ve ayarlamalısınız.), RNA şablonu, spesifik primerler ve problar ekleyin ve RNaz İçermeyen ddH ekleyin2O ila 20 μL.RT-qPCR reaksiyon sisteminin spesifik hazırlığı aşağıdaki tablo 1'e atıf yapılabilir.
Tablo 1: RT-qPCR sisteminin hazırlanması
| Bileşen | Hacim | Nihai konsantrasyon |
| 2× Doğrudan RT-qPCR Tamponu | 10 uL | 1× |
| Foreasy Ters Transkriptaz (MMLV) | 10-30 Ü | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimeraz | 1-2 kişi | |
| İleri Primer(10 μM) | 0,8 uL | 50-900nM |
| Ters Astar(10 uM) | 0,8 uL | 50-900nM |
| Prob(4 uM) | 1 uL | 200nM |
| Şablon(RNA veya Lizat) | X uL | |
| 20× ROX Referans Boyası | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Toplam ses | 20 uL |
Not: Forward Primer ve Reverse Primer, hedef genin spesifik primerleridir.qPCR sistemi, pratik deneysel ve PCR modellerine göre ayarlanabilir.Çoğu primerin nihai konsantrasyonu için 400 nM öneririz.Spesifik primerlerin ve probların hacmini lütfen hazırlanan konsantrasyona ve tavsiye edilen son konsantrasyona göre ayarlayın.
1*: Farklı kantitatif PCR cihazlarına göre uygun nihai ROX Referans Boya konsantrasyonunu seçin.Yaygın kantitatif PCR cihazlarının optimum ROX Referans Boya konsantrasyonu aşağıdaki tabloda gösterilmektedir:
| Kantitatif PCR cihazları | ROX Referans Boyasının son konsantrasyonu |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Birinci Adım,vesaire. | 1× (örneğin, 20 μL reaksiyon sisteminde 1μl 20×ROX Referans Boyası ekleyin) |
| ABI 7500, 7500 Hızlı, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ve Mx4000, vb. | 0,5× (örneğin, 20 μL reaksiyon sisteminde 0,5μl 20×ROX Referans Boyası ekleyin) |
| Roche PCR cihazı, Bio-Rad PCR cihazı, Eppendorf kantitatif PCR cihazı vb. | ROX Referans Boyası Olmadan |
Depolama ve Raf ömrü
Kit -20 ± 5°C'de saklanmalıdır.Hemen -20°C termostatik buzdolabında saklanmalıdır.Uygun koşullarda saklanması durumunda geçerlilik süresi 2 yıldır.
